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ABI梯度pcr儀操作步驟：  

1、打開PCR儀的熱蓋，插入0.2ml的樣品管。蓋好熱蓋。 

2、打開PCR儀的電源，儀器程序開始初始化，需等待幾分鐘。 

3、初始化完成后，顯示主菜單：

4、點“Browse/New Methods”，進(jìn)入PCR程序列表：

5、可以直接點一個PCR程序，選擇“Start Run”運行；點右邊的符號，可以選 擇不同的文件夾。如要新建一個PCR程序，點“New”，出現(xiàn)PCR程序：

6、添加一段程序：點中上方的“Stage”位置，該位置變紅；再點“Add”，軟件將加入一段新的程序。

7、修改循環(huán)數(shù)、溫度、時間：點中循環(huán)次數(shù)、溫度或時間位置，下方出現(xiàn)數(shù)字鍵。依次點數(shù)字鍵，出現(xiàn)合適數(shù)字后，點“Done”確定。

8、增加一個步驟：點“Step”位置，該位置變紅；再點“Add”，軟件將加入一個新的步驟。

9、刪除一個步驟：點“Step”位置，在點“Delete”，軟件將該步驟刪除。

10、建立梯度模式：  

1）點中一個步驟，再點“Option”鍵，出現(xiàn)選項如下

2）點“VeriFlex step”，出現(xiàn)梯度創(chuàng)建窗口：

輸入6個梯度溫度，溫度下方的“1－2”是指對應(yīng)的1、2兩行加熱孔，全部輸好后，點“Done”確定。注意：相鄰的兩個梯度溫度之差大不能超過5℃！ 

11、建立漸變模式：  

1）點中一個步驟，再點“Option”鍵，出現(xiàn)選項如下

2）點“Auto Delta”，出現(xiàn)漸變模式創(chuàng)建窗口。

點“Staring Cycle”，輸入起始循環(huán)數(shù)；點“Delta Temperature”，輸入溫度變化值；點“Delta Time”，輸入時間變化值。漸變模式適用于touchdown PCR，可以提高PCR反應(yīng)的特異性。例：輸入起始循環(huán)數(shù)為2，溫度變化值為＋0.5℃，時間變化值為＋5s，則表示從第2個循環(huán)開始，每循環(huán)一次升溫0.5℃，時間增加5s。

12、增加暫停步驟：  

1）點中一個步驟，再點“Option”鍵，出現(xiàn)選項如下

2）點“Pause”，出現(xiàn)如下窗口。

輸入暫停的起始位置，暫停間隔和暫停時間，點“Done”確定。上圖表示每隔10個循環(huán)暫停10s，在10個循環(huán)的第1個循環(huán)之前暫停。

13、編輯PCR程序完成后，點“Save”保存。

點“Ru Method”，輸入PCR程序名稱；點 ，選擇保存PCR程序的文件夾（如 果要保存在USB文件夾中，需要先插U盤）。再輸入反應(yīng)體積和熱蓋溫度（這兩項在運行程序時可以修改）。點“SaveδExit”確定。

14、回到PCR程序列表界面，選擇新建的PCR程序。

15、點“Start Run”，出現(xiàn)運行參數(shù)設(shè)置窗口

 輸入反應(yīng)體積和熱蓋溫度，點“Start Run Now”開始運行PCR程序。 

16、儀器運行選中的PCR程序，顯示運行監(jiān)視窗口

A- 運行狀態(tài)欄，顯示運行溫度和剩余時間

B- 加熱警示標(biāo)記

C- 階段指示

D- 步驟溫度

E- 步驟時間

F- 步驟指示

C- 狀態(tài)報告，顯示日期、時間和儀器狀態(tài)

D- 延伸箭頭，點箭頭可以顯示更多的步驟 

16、暫停運行：  點“Pause Run”，儀器暫停，出現(xiàn)暫停選項欄

 “Remaining Time”顯示暫停剩余時間，“Elapse Time”顯示已暫停時間。 

如果需要修改暫停時間，點 ，輸入時間值，點“Done”確定；點“Resume Run”， 結(jié)束暫停，繼續(xù)運行PCR程序。

17、終止運行：點“Stop”可以終止整個PCR程序。 

18、反應(yīng)報告：  

PCR程序結(jié)束后，儀器會自動生成反應(yīng)報告，顯示當(dāng)次反應(yīng)的各項指數(shù)。該報告可以保存和打印。

19、PCR反應(yīng)結(jié)束后，打開熱蓋，取出樣品，關(guān)閉儀器電源。并開蓋放置，使熱蓋和加熱模塊正常降溫。

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