新型人iPS/ES細胞標記抗體
iPSelector是一款使用人iPS細胞作為免疫原制備的，可識別lacto-N-fucopentaoseⅠ（LNFPⅠ）的抗體。LNFPⅠ是存在于未分化的人ES細胞、人iPS細胞表面的糖鏈，由于細胞分化后不再表達LNFPⅠ，因此iPSelector可作為未分化iPS/ES細胞的標記物使用。

新型人iPS/ES細胞標記抗體

iPSelector<Anti-LNFP Ⅰ, Human, Mouse-Mono(R-17F)>

 

 

iPSelector是一款使用人iPS細胞作為免疫原制備的，可識別lacto-N-fucopentaoseⅠ（LNFPⅠ）的抗體。LNFPⅠ是存在于未分化的人ES細胞、人iPS細胞表面的糖鏈，由于細胞分化后不再表達LNFPⅠ，因此iPSelector可作為未分化iPS/ES細胞的標記物使用。

另外，由于該產(chǎn)品與未分化人iPS/ES細胞結(jié)合會發(fā)揮細胞傷害作用，因此亦可用于去除未分化iPS/ES細胞。

 

※ 本產(chǎn)品僅供研究使用。研究以外不可使用。

※ 本產(chǎn)品基于立命館大學 綜合科學技術(shù)研究機構(gòu)與藥學部及（獨）醫(yī)藥基礎(chǔ)、健康、營養(yǎng)研究所的共同研究成果商品化而成。

 

◆關(guān)于人iPS/ES細胞標記抗體

迄今為止，iPS/ES細胞標記抗體（TRA-1-60、TRA-1-81、SSEA-3、SSEA-4抗體等）被廣泛用于確認人iPS/ES細胞的未分化狀態(tài)。然而，這些抗體大部分都是使用胚胎癌細胞（embryonal carcinoma細胞：EC細胞）作為免疫原開發(fā)的抗體，與EC細胞交叉性很強。而且，如TRA（tumor rejecton antigen）的名字所示，TRA抗體能夠與多種癌細胞反應(yīng)。綜上所述，TRA-1-60、TRA-1-81、SSEA-3、SSEA-4抗體等并不能稱為iPS/ES的特異性抗體。

iPSelector <Anti-LNFP I, Human, Mouse-Mono(R-17F)>來源于人iPS細胞作為免疫原制備的雜交瘤細胞，從中篩選出滿足人iPS細胞陽性、人EC細胞陰性條件的單克隆抗體。由于本產(chǎn)品幾乎不與EC細胞交叉反應(yīng)，能夠高選擇性、特異性地識別未分化人iPS/ES細胞，因此可以用作新型人iPS/ES細胞標記抗體。

 

◆特點

●　特異性識別未分化人iPS/ES細胞的小鼠單克隆抗體（亞型：IgG1，克隆號：R-17F）

●　可用作識別人iPS/ES細胞的標記抗體。

●　即使是人iPS/ES細胞集落的內(nèi)部，也能夠均勻地染色所有人iPS / ES細胞的細胞膜。

●　與未分化人iPS/ES細胞結(jié)合時會發(fā)揮細胞傷害作用，可用于去除未分化iPS/ES細胞。

 

■　比較iPSelector與現(xiàn)有標記抗體的細胞結(jié)合性

不同于目前常用的人多能干細胞標記抗體TRA-1-60，TRA-1-81等，iPSelector雖然與iPS細胞（Tic）以及ES細胞（KhES-3，H9）結(jié)合良好，但基本不與EC（2102Ep，NCR-G3）細胞結(jié)合。

 

細胞	本產(chǎn)品	TRA-1-60	TRA-1-81	SSEA-3	SSEA-4	SSEA-1*	Nanog
表位	糖脂質(zhì)	硫酸角質(zhì)素	硫酸角質(zhì)素	球蛋白	球蛋白	LeX	轉(zhuǎn)錄因子
Tic (iPS)	++++	++++	++++	++++	++++	+	+++
KhES-3 (ES)	+++	++++	++++	+++	++++	+	+++
H9 (ES)	++++	++++	++++	+++	++++	+/-	+++
2102Ep (EC)	+/-	++++	++++	+++	+++	+	+++
NCR-G3 (EC)	++	++++	++++	+++	++++	++	++++

 

*SSEA-1小鼠ES/iPS標記抗體

 

◆應(yīng)用實例

■　蛋白印跡

進行5 μg細胞裂解液的蛋白印跡。 左：人iPS細胞（LNFPⅠ表達） 右：HEK293細胞（LNFPⅠ不表達） 稀釋度：2,000倍（0.5 μg/mL） 二抗：Anti-Mouse IgG, Goat-Poly, HRP（KPL公司 #5220-0337） 化學發(fā)光底物：Trident plus Western HRP Substrate（GNT公司 #GTX400006） 檢測：使用LuminoGraph I (ATTO)在1 min內(nèi)檢測 由于LNFPⅠ為糖鏈，可在蛋白印跡中觀察到多條條帶。這些條帶都為未分化人iPS特異性條帶，而在HEK293細胞中未檢測出。

 

■　免疫細胞染色

使用iPSelector和現(xiàn)存的標記抗體，染色人iPS細胞集落。在SSEA-3抗體和SSEA-4抗體中，無法染色所有人iPS細胞，但iPSelector可以均勻染色細胞集落中包含的所有人iPS細胞的細胞膜。

 

 

■　流式細胞儀

將iPSelector用于流式細胞儀。

由圖可知，陰性對照無法識別未分化人iPS細胞（僅二抗/下圖紫色部分），但iPSelector可以識別（下圖橙色部分）。

 

?

 

■　Functional Assay（對人iPS細胞的濃度依賴性細胞毒性）

iPSelector顯示出較強的人iPS/ES細胞特異性細胞毒性（補體非依賴性）（左圖）。通過二抗處理大幅增加了細胞毒性（右圖）。

已經(jīng)確認了不僅對單細胞懸液中的細胞的毒性，而且對形成細胞集落的細胞也有毒性。細胞死亡的機制是通過壞死而非凋亡。

 

 

左圖：iPSelector與人iPS細胞株（Tic細胞）在4°C下孵育45 min后的活細胞數(shù)。iPSelector與同型的α-MBP抗體（對照）不同，擁有抗體濃度依賴性的細胞傷害作用。

右圖：iPSelector濃度為1 μg/100 μL時添加二抗能進一步增強細胞毒性。添加0.1μg/100μL二抗時，90%以上的細胞被殺死。

 

■　iPSelector的人ES/iPS細胞傷害活性

除了Tic細胞株（人iPS細胞）以外，iPSelector對世界上常用的人iPS細胞株201B7和人ES細胞株H9以及KhES-3也顯示相同的細胞傷害活性。將細胞和抗體在4℃下孵育45 min，活細胞數(shù)量隨iPSelector濃度的增加而減少。

 

 

◆抗體信息

●　免疫原：人iPS細胞（Tic）

●　小鼠單克隆抗體（克隆號：R-17F）

●　亞型：IgG1

●　驗證交叉性：人

●　表位：存在于人iPS/ES細胞膜表面的糖脂質(zhì)的糖鏈部分lacto-N-fucopentaoseⅠ (LNFPⅠ: Fuc 1-2Gal 1-3GlcNAc 1-3Gal 1-4Glc)

●　應(yīng)用：免疫細胞染色、蛋白印跡、流式細胞術(shù)、去除未分化人iPS/ES細胞

●　產(chǎn)品規(guī)格：Protein A純化（（1mg/mL，添加50％甘油，未添加防腐劑）

 

◆參考文獻

1. Kawabe, K., et al., Glycobiology, 23, 322, (2013).

2. Matsumoto, S., et al., J. Biol. Chem., 290, 20071, (2015).

3. Nakao, H., et al., Glycoconj. J., DOI 10.1007/s10719-0169-9710-2

 

◆產(chǎn)品列表

產(chǎn)品編號	產(chǎn)品名稱	包裝
FDV-0014A	iPSelector (Anti-LNFPⅠ, Human, Mouse-Mono(R-17F))	25 μL
FDV-0014B	iPSelector (Anti-LNFPⅠ, Human, Mouse-Mono(R-17F))	100 μL