產(chǎn)品簡介：

本產(chǎn)品是基于熒光探針檢測的即用型 RT-PCR 試劑盒，可以對靶 RNA 分子進行實時定量 RT-PCR 分析（quantitative RT-PCR、qRT-PCR）。產(chǎn)品含有經(jīng)過優(yōu)化的緩沖液組分、逆轉錄酶、熱啟動 Taq DNA 聚合酶、Taq DNA 穩(wěn)定劑dNTPs、MgCl2 和穩(wěn)定劑等所有實時定量 RT-PCR 所需要的成分，用戶只需加入 RNA 模板、引物和探針即可進行探針法實時定量 RT-PCR 反應，具有廣泛的用途。

產(chǎn)品特點：

1.以 2×Mix 提供，用戶只需準備模板、引物、探針和 ROX 染料（取決于 qPCR儀器）即可以進行探針法實時定量 RT-PCR 實驗，非常方便快捷，降低了操作誤差。

2.各成分的濃度和比例都經(jīng)過精心優(yōu)化，反應的靈敏度高，特異性強。靈敏度  最高時可以達到 50 拷貝/反應（跟模板質量，引物設計等相關）。

3.既可用于TaqMan 探針qRT-PCR，也可以是分子信標（molecular beacon的 qRT-PCR。

4.靈敏度和專一性比染料法熒光定量 RT-PCR 更高。

5.可用于基因表達分析、SNP 分析、拷貝數(shù)分析等實驗。也可以用于定性檢。

6.探針法qRT-PCR試劑盒只能用于科研，1 mL 足夠 100 次 20 μL 體系的探針法 qRT-PCR反應。

產(chǎn)品參數(shù)：

產(chǎn)品規(guī)格

50次

運輸及保存

低溫運輸，-20℃保存，保存期限為 12 個月。

放置三周。

自備試劑

RNA 模板、引物、TaqMan 探針、超純水。

使用方法：

一、如果有 N 個樣品并且做定量分析，最好設置 N+7 個反應，多出的 7 個中， 6 個是做標準曲線的陽性對照，一個是陰性對照（NC）。在 N+7 個 PCR 管中加入下列成分。如果是做定性分析，則 6 個做標準曲線的樣品縮減成一個陽性對

照（PC），用戶自己需要根據(jù)下表進行適當修改（把 6 個標曲反應改成 1 個陽

性對照反應）。

成分N 個樣品

管6 個標準曲線

管NC 管

探針法 qRT-PCR 緩沖液各 10 μL10 μL10 μL

自備引物 1（10 μM）各 1 μL各 1 μL1 μL

自備引物 2（10 μM）各 1 μL各 1 μL1 μL

N 個自備模板 RNA各 1-2 μL不加不加

自備陽性對照模板（6 個梯度）不加各 1 μL（1 管

加 1 個梯度）不加

陰性對照模板（水）不加不加1 μL

自備探針（5 μM）各 1 μL各 1 μL1 μL

自備 50×ROX I 染料或自備

50×ROXII 染料（見注）各 0.4 μL各 0.4 μL0.4 μL

探針法 qRT-PCR 酶混合液2 μL2 μL2 μL

補超純水到20 μL20 μL20 μL

注，下列信息僅供參考，具體以 qPCR 儀器的使用手冊為準。

1、不需要ROX 的機型：AgilentMX3000 和MX4000、iCycler IQ、LightCycler 480、SmartCycler System、Thermal Cycler Dice RealTime System 等型號的熒光 PCR 儀器不需要加 ROX 染料，但加入的話也不會影響整個 PCR 分析2、需要使用ROXI 的機型：ABIPrism7000、7300、7700、7900HT、Step One Step One Plus。

3、需要使用 ROXII 的機型：ABIPrism7500、7500Fast、MJ Opticon、MJ Chromo4、CorbettRotorGene3000。

二、放入熒光 PCR 儀中進行擴增, 下表的擴增參數(shù)僅供參考，一定需要根據(jù)靶分子長度，引物和探針的 Tm 值、標記染料的種類等進行調節(jié)。一般選擇三步法PCR：蓋上蓋子后上機，按下面參數(shù)進行 RT-PCR：

三、數(shù)據(jù)處理

1. 如果把本試劑盒用于定量檢測，則以陽性對照濃度的 log 值為橫軸，以 Ct 值為縱軸，繪制標準曲線。再以待測樣品的 Ct 值從標準曲線上推算出樣品DNA 濃度的 log 值，再推算出其濃度。如果把本試劑盒用于定性檢測，只判斷陽性或陰性。一般情況下，陰性對照 Ct 大于或等于 40（閾值需要以陰性

對照的Ct 值確定，此處為便于敘述以40 為例，具體情況很可能閾值不一樣）

陽性對照必須有熒光對數(shù)增長，有典型擴增曲線，Ct 值應該小于或等于 30。對待測樣品，如果其 Ct 大于或等于 40 則為陰性，如果小于或等于 35 則為陽性。如果在 35-40 之間，則重復一次。重復實驗的 Ct 值如果大于或等于

40 則為陰性，如果小于 40，則為陽性。

選擇我們的探針法qRT-PCR試劑盒，就是選擇精準、高效、可靠的檢測方案，為您的科研實驗保駕護航！