逆轉(zhuǎn)錄試劑盒
| 參考價(jià) | ￥ 1290 |
| 訂貨量 | ≥1盒 |
- 公司名稱 上海烜雅生物科技有限公司
- 品牌 烜雅生物
- 型號(hào)
- 產(chǎn)地 國(guó)產(chǎn)
- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)廠家
- 更新時(shí)間 2025/4/24 15:09:51
- 訪問次數(shù) 10
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科研試劑，檢測(cè)試劑盒，原代細(xì)胞，細(xì)胞系，菌種，核酸染料，熒光PCR試劑盒，ELISA檢測(cè)試劑盒，染料法PCR試劑盒，質(zhì)粒基因
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 50次 |
|---|---|---|---|
| 貨號(hào) | XY-D-1762 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工,生物產(chǎn)業(yè) |
| 主要用途 | 科研 | 英文名稱 | Reverse Transcription Kit |
| 保存條件 | -20℃ | 有效期 | 1年 |
產(chǎn)品簡(jiǎn)介：
本試劑盒提供合成 cDNA 第一鏈（逆轉(zhuǎn)錄）所需要的全部試劑。其原理是用突變的莫洛尼氏鼠白血病病毒反轉(zhuǎn)錄酶（M-MuLV RT）以 RNA 為模板，高效合成 cDNA。
產(chǎn)品特點(diǎn)：
1.使用突變的反轉(zhuǎn)錄酶，內(nèi)源 RNase H 活性低，使得在逆轉(zhuǎn)錄過程中 RNA 模板不容易被降解，得到的 cDNA 平均長(zhǎng)度更長(zhǎng)。
2.最長(zhǎng)可合成 13 Kb 的 cDNA。
3.可以使用 oligo-dT、隨機(jī)引物和 RNA 專一性引物三種引物（前兩種本試劑盒提供）。
4.總 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作為模板。
5.得到的 cDNA 可用于后續(xù)的 cDNA 文庫(kù)構(gòu)建、RT-PCR、探針標(biāo)記等。
6.本產(chǎn)品足夠 50 次 20 ?L 體系的逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。
7.逆轉(zhuǎn)錄試劑盒只能用于科研。
產(chǎn)品參數(shù)：
產(chǎn)品規(guī)格
50次
運(yùn)輸及保存
低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期一年。
自備試劑
無
使用方法：
一：合成 PCR 用的 1st-strand cDNA
1. 在一干凈的反應(yīng)管中加入RNA 模板。注意：RNA 模板不能含有基因組 DNA 污
染。
RNA 模板種類加入量
總 RNA100-500 ng
或 poly(A) mRNA10-500 ng
或?qū)Ｒ坏?RNA
2.加入引物和水
0.01 pg-500 ng
引物種類加入量
Oligo (dT)12-18，0.5 ?g/?L1 ?L
或隨機(jī)引物(6 堿基，無-修飾)，
0.2 ?g/?L1 ?L
或 RNA 模板專一性引物15-20 pmol
注意：隨機(jī)引物與 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平
均長(zhǎng)度成反比。
3.加水到 13 ?L 。
4.70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴，此步可以打開 RNA 的二級(jí)結(jié)構(gòu)。
5.再加入 5 ?L 4×RT Buffer（含 dNTP）。
6.37℃保溫 5 分鐘。對(duì)富含二級(jí)結(jié)構(gòu)的高 GC RNA 模板，可以改成 45℃保溫 5 分鐘。但如果使用隨機(jī)引物，由于其很短，則改成 25℃ 5 分鐘以便其跟RNA 結(jié)合。
7.加入 1 ?L MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶（含 RI），反應(yīng)終體積為 20 ?L。
8.42℃保溫 60 分鐘。但如果使用隨機(jī)引物，需要先 25℃保溫 10 分鐘，待合成了一段 cDNA 后，然后再轉(zhuǎn)移到 42℃保溫 60 分鐘。此步為 RT 反應(yīng)。
9.70℃保溫 10 分鐘以終止反應(yīng)，然后放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以直接作為PCR 模板使用，不需要純化。
二：合成建文庫(kù)用的 1st-strand cDNA
1.在一干凈的反應(yīng)管中加入RNA 模板。注意：RNA 模板不能含有基因組 DNA 污染。
2.加入引物
引物種類加入量
Oligo (dT)12-18，0.5 ?g/?L1 ?L
或隨機(jī)引物(6 堿基，無-修飾)
0.2 ?g/?L1 ?L
或 RNA 模板專一性引物100 pmol
注意：隨機(jī)引物與 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均長(zhǎng)度成反比。
3.加水到 13 ?L。
4.70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴，此步可以打開 RNA 的二級(jí)結(jié)構(gòu)。
5.再加入 5 ?L 4×RT Buffer（含 dNTP）。
6.37℃保溫 5 分鐘。對(duì)富含二級(jí)結(jié)構(gòu)的高 GC RNA 模板，可以改成 45℃保溫 5
分鐘。如果使用隨機(jī)引物，則改成 25℃ 5 分鐘。
7.加入 2 ?L MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶（含 RI），反應(yīng)終體積為 20 ?L。
8.42℃保溫 60 分鐘，但如果使用隨機(jī)引物，需要先 25℃保溫 10 分鐘，然后再轉(zhuǎn)移到 42℃保溫 60 分鐘。此步為 RT 反應(yīng)。
9.70℃保溫 10 分鐘以終止反應(yīng)，放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于第二鏈 cDNA 的合成或放置在-20℃長(zhǎng)期保存。
選擇我們的逆轉(zhuǎn)錄試劑盒，就是選擇精準(zhǔn)、高效、可靠的檢測(cè)方案，為您的科研實(shí)驗(yàn)保駕護(hù)航！
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