α-葡萄糖苷酶（α-Glucosidase, α-GC）試劑盒說明書

分光光度法 50 管/24 樣

正式測定前務(wù)必取 2-3 個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定測定意義：

α-GC(EC 3.2.1.20)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，催化水解芳基或烴基與糖基之間的α-糖苷鍵生成葡萄糖，不僅與細(xì)胞壁的松弛或加固有關(guān)，而且與細(xì)胞識別和一些信號分子產(chǎn)生密切相關(guān)。

測定原理：

α-GC 分解對-硝基苯-α-D 吡喃葡萄糖苷生成對-硝基ben酚，后者在 400nm 有最大吸收峰，通過測定吸光值升高速率來計算α-GC 活性。

α-葡萄糖苷酶試劑盒 糖代謝系列-常備現(xiàn)貨

組成：

試劑一：粉劑×2 瓶，-20℃保存；臨用前每瓶加入 10ml 蒸餾水，充分溶解備用；用不完的試劑仍-20℃保存。

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)

自備儀器和用品：

可見分光光度計、臺式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1ml 玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

粗酶液提取：

1、細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（10⁴ 個）：提取液體積（ml）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1ml 提取液），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次）；15000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。

2、組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1ml 提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。15000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。

測定步驟：

1、分光光度計預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長至 400nm，蒸餾水調(diào)零。

2、加樣表

充分混勻，放入 37℃準(zhǔn)確水浴 30min 后，立即放入 95℃水浴 5min（蓋緊，以防止水分散失），流水冷卻后充分混勻（以保證濃度不變），8000g，4℃，離心 5min，取上清液

充分混勻，室溫靜置 2min 后， 400nm 處測定吸光值A，計算ΔA=A 測定管-A 對照管。每個測定管需設(shè)一個對照管。

α-GC 活力計算：

標(biāo)準(zhǔn)條件下測定的回歸方程為y =0.00543x -0.0027；x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（nmol/ml），y 為吸光值。

（1） 按樣本蛋白濃度計算：

單位的定義：每mg 組織蛋白每分鐘產(chǎn)生 1nmol 對-硝基ben酚定義為一個酶活力單位。

α-GC 活力(nmol/min/mg prot)=[(ΔA+0.0027)÷0.00543×V 反總]÷(V 樣×Cpr)÷T

=61.39×(ΔA+0.0027) ÷Cpr

需要另外測定，建議使用本公司BCA 蛋白質(zhì)含量測定試劑盒。

（2） 按樣本鮮重計算：

單位的定義：每g 組織每分鐘產(chǎn)生 1nmol 對-硝基ben酚定義為一個酶活力單位。

α-GC 活力(nmol/min /g 鮮重)＝[(ΔA+0.0027)÷0.00543×V 反總]÷(W×V 樣÷V 樣總)÷T

=61.39×(ΔA+0.0027) ÷W

（3） 按細(xì)菌或細(xì)胞密度計算：

單位的定義：每 1 萬個細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘產(chǎn)生 1nmol 對-硝基ben酚定義為一個酶活力單位。

α-GC 活力(nmol/min /10⁴ cell)=[(ΔA+0.0027) ÷0.00543×V 反總]÷(500×V 樣÷V 樣總)÷T

=0.123×(ΔA +0.0027)

V 反總：反應(yīng)體系總體積，1ml；V 樣：加入反應(yīng)體系中樣本體積，0.1ml；V 樣總：加入提取液體積，1ml；

Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g； 500：細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù)，500 萬；T：反應(yīng)時間，30min。

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