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上海語純生物科技有限公司
初級會員·1年EC96301EHA105感受態(tài)（電轉）
| 參考價: | 面議 |
具體成交價以合同協(xié)議為準- EC96301 產(chǎn)品型號
- 語純生物 品牌
- 生產(chǎn)商 廠商性質
- 上海市 所在地
訪問次數(shù)：48更新時間：2025-04-23 16:56:18
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產(chǎn)品簡介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 10 ×50ul/100×50ul |
|---|---|---|---|
| 貨號 | EC96301 | 應用領域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè),制藥/生物制藥 |
產(chǎn)品貨號：EC96301
產(chǎn)品規(guī)格：10 ×50ul/100×50ul
本產(chǎn)品僅供科學研究或進一步生產(chǎn)使用，不可用于臨床診斷或治療。
產(chǎn)品介紹
EHA105感受態(tài)（電轉）
產(chǎn)品簡介
EHA105菌株由 EHA101 菌株改造而來，為 C58型背景，核基因中含有篩選標簽——利福平抗性基因 Rif，
為了便于轉化操作，此菌株攜帶一無自身轉運功能的琥珀堿型 Ti 質粒 pEHA105 (pTiBo542DT-DNA)，
此質粒含有 vir 基因 (vir 基因是 T-DNA 插入植物基因組必需的元件，pEHA105 (pTiBo542DT-DNA)質粒
自身的 T-DNA 轉移功能被破壞，但可以幫助轉入的雙元載體 T-DNA 順利轉移)。EHA105 菌株適用于水
稻、煙草等植物的轉基因操作。本公司開發(fā)的 EHA105 電轉感受態(tài)特別適用于大質粒的轉化：經(jīng)
pCAMBIA2301 質粒 (size:11633 bp)檢測轉化效率>105 cfu/μg DNA。
產(chǎn)品組成
組分
EHA105
電轉感受態(tài)細胞
10 × 50μL
100 × 50μL
定制
基因型：C58 (RifR) Ti pEHA105 (pTiBo542DT-DNA) Succinamopine
存儲條件
-80 ℃保存；請勿將本品置于-20 ℃或者液氮中保存。
質量控制
除琥珀堿型 Ti 質粒 pEHA105 外，無外源質粒 DNA 殘留；
電轉法轉化效率≥105 cfu/μg DNA。
使用方法
1. 將新的 2 mm 電擊杯插入冰中預冷；或者將儲存于 75%乙醇中的 2 mm 電擊杯和杯蓋取出，在超凈工
作臺中將其倒置于干凈的吸水紙上，使乙醇充分揮發(fā)，然后插入冰中預冷；
2. 取-80℃保存的農(nóng)桿菌感受態(tài)插入冰中待其融化，加入 0.01-1μg 質粒 DNA（體積不大于 5μl），用
200μl 槍頭將感受態(tài)-質粒混合物快速轉移到預冷的電擊杯中，蓋上杯蓋；
3. 開啟電轉儀，設置參數(shù)（2500 V ，200 Ω，25μF），將電擊杯快速放入電轉槽中，電擊完成后快速插
入冰中，加入 900μl 無抗生素的 YEB 并將感受態(tài)細胞轉移到無菌空管中，28 ℃振蕩培養(yǎng) 2~3 小時。
（注：此電轉化參數(shù)為 Bio-rad 推薦，使用者也可使用電轉儀所推薦的 Protocol 進行操作）
4. 6000 rpm 離心一分鐘收菌，留取 100μl 左右上清將菌體輕輕吹勻，并涂布于含相應抗生素的 YEB 平板
上，倒置放于 28℃培養(yǎng)箱培養(yǎng) 2~3 天（當平板只含有 50μg/ml Kan 時，28 ℃培養(yǎng) 48 h 即可；平板中同
時加入 50μg/ml Kan，20μg/ml Rif 時，需 28 ℃培養(yǎng) 60 h；如果使用的平板含有 50μg/ml Rif 時，則需要
28 ℃培養(yǎng) 72~90 h）。
注意事項
1. 感受態(tài)細胞解凍后應立即使用；
2. 加入的待轉化 DNA 的總體積不應超過感受態(tài)細胞體積的 1/10；
3. 利福平濃度不應高于 25μg/μl，利福平濃度過高不利于農(nóng)桿菌生長，會降低其生長速度和轉化效率。
4. 由于 Ti 質粒丟失的概率極低（可以忽略），所以相關抗性基因可以不用添加。
EHA105感受態(tài)（電轉）
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