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實(shí)驗室推薦人癌胚抗原(CEA)ELISA檢測試劑盒在國內(nèi)眾多實(shí)驗室被廣泛使用，深受廣大科研者的好評。上海軒澤康生物專ye供應(yīng)酶聯(lián)免疫分析試劑盒，部分現(xiàn)貨供應(yīng)產(chǎn)品有人、大鼠、小鼠、兔、豬、犬、雞、猴、植物等ELISA試劑盒。所有elisa試劑盒均提供免費(fèi)代測，實(shí)驗全程提供技術(shù)指導(dǎo)。歡迎新老客戶咨詢、訂購！

一.   檢測原理：

試劑盒采用雙抗一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。往預(yù)先包被人癌胚抗原（CEA）抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、HRP標(biāo)記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD 值），與CUTOFF值相比較，從而判定標(biāo)本中人癌胚抗原（CEA）的存在與否。

二. 96T試劑盒組成及其配置：

①微孔酶標(biāo)板（ 12 孔×8 條）；

②陰性對照 0.5mL；

③陽性對照 0.5mL；

④檢測抗原-HRP 10mL；

⑤20×洗滌緩沖液 25mL；

⑥稀釋液 6mL；

⑦底物 A 6mL；

⑧底物 B 6mL；

⑨終止液 6mL；

⑩封板膜 2 張；說明書 1 份；自封袋 1 個.

備注：20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按 1：20 稀釋，即 1 份的 20×洗滌緩沖液加 19 份的蒸餾水。

三. 實(shí)驗室推薦人癌胚抗原(CEA)ELISA檢測試劑盒操作步驟:

①從室溫平衡 20min 后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回 4℃。

②設(shè)置陰、陽性對照孔和樣本孔，陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照各 50μL；

③待測樣本孔先加待測樣本 10μL，再加稀釋液 40μL；

④隨后陰、陽性對照孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測抗體 100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育 60min。

⑤棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置 1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板 5 次（也可用洗板機(jī)洗板）。

⑥每孔加入底物 A、B 各 50μL，37℃避光孵育 15min。

⑦每孔加入終止液 50μL，15min 內(nèi)，在 450nm 波長處測定各孔的OD 值。

四. 產(chǎn)品展示：

五. 實(shí)驗結(jié)果判斷：

①試驗有效性：陽性對照孔 OD 值平均值≥1.00； 陰性對照孔 OD 值平均值≤0.15。

② 臨界值（Cut off）計算：臨界值=陰性對照孔平均值+0.15

③陰性判斷：樣品 OD 值＜臨界值（Cut off），樣品為陰性

④陽性判斷：樣品 OD 值＞臨界值（Cut off），樣品為陽性

六. 常見問題解答：

1.   問：如何選擇合適的陽性對照？

上海軒澤物解答：陽性對照的基本組成應(yīng)該盡量與檢測樣本的組成一致，一般陽性對照多以含蛋白保護(hù)劑的緩沖液為基質(zhì)，加入一定量的待檢物質(zhì)。比如：以人血清為標(biāo)本的測定，陽性對照多用確定的病人血清或者以覆蓋人血漿為原料加入一定量標(biāo)準(zhǔn)品。

2. 問：我能否在實(shí)驗開始前*收集樣品？

上海軒澤物解答：可以。如若收集的樣本不能及時進(jìn)行檢測，請保存至-20℃或按照說明書進(jìn)行保存。應(yīng)避免反復(fù)凍融。