植物香豆酸3-羥基化酶(C3H)ELISA檢測試劑盒檢測前準備工作：

1.      請?zhí)崆?0分鐘從冰箱中取出試劑盒，平衡至室溫。

2.      從冰箱中取出的濃縮洗滌液可能有結晶，屬于正?，F(xiàn)象；放置室溫，輕搖均勻，待結晶溶解后再配置洗滌液?？蓪?0ml濃縮洗滌液用蒸餾水或去離子水稀釋配置成400ml工作濃度的洗滌液，未用完的放回4℃

3.      20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。

檢測原理：試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被香豆酸-3-羥基化酶（C3H）抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的香豆酸-3-羥基化酶（C3H）呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品活性。

樣品收集、處理及保存方法：植物香豆酸3-羥基化酶(C3H)ELISA檢測試劑盒

1.  樣本不能含疊氮鈉（NaN3），因為疊氮鈉（NaN3）是辣根過氧化物酶（HRP）的抑制劑。

2.  標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行。

3.  植物萃取液或其它相關樣本：請1000 x g離心20分鐘，取上清即可檢測。

（植物處理方案）

1、 新鮮植物組織請在液氮中充分研磨，如無液氮，剪碎，玻璃勻漿器研磨也可；

2、 加入樣品體積9倍（鮮重：勻漿液體積）的提取液（0.1mmol PH7.4 PBS ）, 4℃浸提2h；

3、 請于4℃ ，3000rpm，離心10min，收集上清；

4、 取上清檢測。

【樣本儲存】：收集樣本必須清楚檢測的成份是否足夠穩(wěn)定。對收集后當天檢測的標本，儲存再4℃?zhèn)溆?，如有特殊原因需要周期收集標本，將標本分裝凍存在-20℃或-80℃。避免反復凍融。標本2-8℃可保存48小時，-20℃可保存1個月。-80℃可保存6個月。

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