種類
熒光光譜法具有靈敏度高、選擇性強(qiáng)、用樣量少、方法簡(jiǎn)便、工作曲線線形范圍寬等優(yōu)點(diǎn),可以廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)、醫(yī)學(xué)、藥學(xué)和藥理學(xué)、有機(jī)和無(wú)機(jī)化學(xué)等領(lǐng)域。熒光分光光度計(jì)校準(zhǔn)外校國(guó)家合作計(jì)量校正
熒光分光光度計(jì)的發(fā)展經(jīng)歷了手控式熒光分光光度計(jì),自動(dòng)記錄式熒光分光光度計(jì),計(jì)算機(jī)控制式熒光分光光度計(jì)三個(gè)階段;熒光分光光度計(jì)還可分為單光束式熒光分光光度計(jì)和雙光束式熒光分光光度計(jì)兩大系列。其他的還有低溫激光Sh p ol’skill熒光分光光度計(jì),配有壽命和相分辨測(cè)定的熒光分光光度計(jì)等。
構(gòu)成
1. 光源:
為高壓汞蒸氣燈或氙弧燈,后者能發(fā)射出強(qiáng)度較大的連續(xù)光譜,且在300nm~400nm 范圍內(nèi)強(qiáng)度幾乎相等,故較常用。
2.激發(fā)單色器:
置于光源和樣品室之間的為激發(fā)單色器或第一單色器,篩選出特定的激發(fā)光譜。
3.發(fā)射單色器:
置于樣品室和檢測(cè)器之間的為發(fā)射單色器或第二單色器,常采用光柵為單色器。篩選出特定的發(fā)射光譜。
4. 樣品室:
通常由石英池(液體樣品用)或固體樣品架(粉末或片狀樣品)組成。測(cè)量液體時(shí),光源與檢測(cè)器成直角安排;測(cè)量固體時(shí),光源與檢測(cè)器成銳角安排。
5. 檢測(cè)器:
一般用光電管或光電倍增管作檢測(cè)器??蓪⒐庑盘?hào)放大并轉(zhuǎn)為電信號(hào)。
基本原理
由高壓汞燈或氙燈發(fā)出的紫外光和藍(lán)紫光經(jīng)濾光片照射到樣品池中,激發(fā)樣品中的熒光物質(zhì)發(fā)出熒光,熒光經(jīng)過濾過和反射后,被光電倍增管所接受,然后以圖或數(shù)字的形式顯示出來(lái)。
物質(zhì)熒光的產(chǎn)生是由在通常狀況下處于基態(tài)的物質(zhì)分子吸收激發(fā)光后變?yōu)榧ぐl(fā)態(tài), 這些處于激發(fā)態(tài)的分子是不穩(wěn)定的,在返回基態(tài)的過程中將一部分的能量又以光的形式放出,從而產(chǎn)生熒光.熒光分光光度計(jì)校準(zhǔn)外校國(guó)家合作計(jì)量校正
不同物質(zhì)由于分子結(jié)構(gòu)的不同,其激發(fā)態(tài)能級(jí)的分布具有各自不同的特征,這種特征反映在熒光上表現(xiàn)為各種物質(zhì)都有其特征熒光激發(fā)和發(fā)射光譜;,因此可以用熒光激發(fā)和發(fā)射光譜的不同來(lái)定性地進(jìn)行物質(zhì)的鑒定。
在溶液中,當(dāng)熒光物質(zhì)的濃度較低時(shí),其熒光強(qiáng)度與該物質(zhì)的濃度通常有良好的正比關(guān)系,即IF=KC,利用這種關(guān)系可以進(jìn)行熒光物質(zhì)的定量分析,與紫外-可見分光光度法類似,熒光分析通常也采用標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行。
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