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當(dāng)前位置：> 供求商機(jī)> LncRNA RACE 技術(shù)
貨物所在地：上海上海市
產(chǎn)地：上海 閔行區(qū) 江月路999號(hào)
更新時(shí)間：2024-11-07 21:00:07
有效期：2024年11月7日 -- 2025年5月7日
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RACE的原理
RACE 是采用PCR 技術(shù)由已知的部分cDNA 順序來擴(kuò)增出完整cDNA5’和3’末端,是一種簡便而有效的方法, 又被稱為錨定 PCR (anchoredPCR)和單邊PCR(one2side PCR)。
3'RACE的原理
利用mRNA的3'末端的poly（A）尾巴作為一個(gè)引物結(jié)合位點(diǎn)，以連有SMART寡核營酸序列通用接頭引物的Oligo（dT）30MN作為鎖定引物反轉(zhuǎn)錄合成標(biāo)準(zhǔn)*鏈cDNA.然后用一個(gè)基因特異引物GSP1（gene specific primer，GSP）作為上游引物，用一個(gè)含有部分接頭序列的通用引物UPM（universal primer，UPM）作為下游引物，以cDNA*鏈為模板，進(jìn)行PCR循環(huán)，把目的基因3' 末端的DNA片段擴(kuò)增出來。
5'RACE的原理
先利用mRNA的3'末端的poly（A）尾巴作為一個(gè)引物結(jié)合位點(diǎn)，以O(shè)ligo（dT）30MN作為鎖定引物在反轉(zhuǎn)錄酶MMLV作用下，反轉(zhuǎn)錄合成標(biāo)準(zhǔn)*鏈cDNA.利用該反轉(zhuǎn)錄酶具有的末端轉(zhuǎn)移酶活性，在反轉(zhuǎn)錄達(dá)到*鏈的5'末端時(shí)自動(dòng)加上3-5個(gè)（dC）殘基，退火后（dC）殘基與含有SMART寡核苷酸序列Oliogo（dG）通用接頭引物配對(duì)后，轉(zhuǎn)換為以SMART序列為模板繼續(xù)延伸而連上通用接頭（見Figure 2 ）。然后用一個(gè)含有部分接頭序列的通用引物UPM（universal primer，UPM）作為上游引物，用一個(gè)基因特異引物2（GSP 2 genespecific primer，GSP）作為下游引物，以SMART*鏈cDNA為模板，進(jìn)行PCR循環(huán)，把目的基因5'末端的cDNA片段擴(kuò)增出來。終，從2個(gè)有相互重疊序列的3'/ 5'-RACE產(chǎn)物中獲得全長cDNA，或者通過分析RACE產(chǎn)物的3'和5'端序列，合成相應(yīng)引物擴(kuò)增出全長cDNA。
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