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醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè) |
生物透射（掃描）電鏡固定液
生物透射電鏡服務(wù)以及生物樣品掃描電鏡都需要光學(xué)透鏡的焦點(diǎn)是固定的，而電子透鏡的焦點(diǎn)可以被調(diào)節(jié)，因此電子顯微鏡不像光學(xué)顯微鏡那樣有可以移動(dòng)的透鏡系統(tǒng)。現(xiàn)代電子顯微鏡大多采用電磁透鏡，由很穩(wěn)定的直流勵(lì)磁電流通過(guò)帶極靴的線圈產(chǎn)生的強(qiáng)磁場(chǎng)使電子聚焦。
生物透射（掃描）電鏡固定液
生物透射電鏡服務(wù)以及生物樣品掃描電鏡都需要光學(xué)透鏡的焦點(diǎn)是固定的，而電子透鏡的焦點(diǎn)可以被調(diào)節(jié)，因此電子顯微鏡不像光學(xué)顯微鏡那樣有可以移動(dòng)的透鏡系統(tǒng)?，F(xiàn)代電子顯微鏡大多采用電磁透鏡，由很穩(wěn)定的直流勵(lì)磁電流通過(guò)帶極靴的線圈產(chǎn)生的強(qiáng)磁場(chǎng)使電子聚焦。電子源是一個(gè)釋放自由電子的陰極，柵極，一個(gè)環(huán)狀加速電子的陽(yáng)極構(gòu)成的。由于光學(xué)顯微鏡分辨率的限制，蟲體表面細(xì)節(jié)很難在光鏡下觀察清楚，給線蟲分類帶來(lái)了較大困難。
電鏡技術(shù)包含掃描電鏡(scanning electron microscopy,SEM)以及透射電鏡(transmission electron microscope，TEM)。掃描電子顯微鏡,簡(jiǎn)稱為掃描電鏡,是用細(xì)聚焦的電子束轟擊樣品表面,通過(guò)電子與樣品相互作用產(chǎn)生的二次電子、背散射電子等對(duì)樣品表面或斷口形貌進(jìn)行觀察和分析。SEM已廣泛應(yīng)用于材料、冶金、礦物、生物學(xué)等領(lǐng)域。透射電鏡:是以波長(zhǎng)極短的電子束作為照明源,用電磁透鏡聚焦成像的一種具有高分辨本領(lǐng)、高放大倍數(shù)的電子光學(xué)儀器,主要應(yīng)用于物質(zhì)內(nèi)部的超微結(jié)構(gòu)觀察。
樣品掃描電鏡透射電鏡固定液介紹：
固定的目的是盡可能使細(xì)胞中的各種細(xì)胞器以及大分子結(jié)構(gòu)保持生活狀態(tài)，并且牢固地固定在它們?cè)瓉?lái)所在的位置上。固定的方法有物理的和化學(xué)的兩大類。物理的方法系采用冰凍、干燥等手段來(lái)保持細(xì)胞結(jié)構(gòu)；化學(xué)的方法是用一定的化學(xué)試劑來(lái)固定細(xì)胞結(jié)構(gòu)?，F(xiàn)通常使用化學(xué)方法對(duì)組織或細(xì)胞進(jìn)行固定。
生物透射（掃描）電鏡固定液是常用固定劑：
1、是一種強(qiáng)氧化劑，與氮原子有較強(qiáng)的親和力，因而對(duì)于細(xì)胞結(jié)構(gòu)中的蛋白質(zhì)成分有良好的固定作用。它還能與不飽和脂肪酸反應(yīng)使脂肪得以固定。此外，還能固定脂蛋白，使生物膜結(jié)構(gòu)的主要成分磷脂蛋白穩(wěn)定。它還能與變性DNA以及核蛋白反應(yīng)，但不能固定天然DNA、RNA及糖原。固定劑有強(qiáng)烈的電子染色作用，用它固定的樣品圖象反差較好。固定的時(shí)間一般為1-2小時(shí)。
2．戊二醛(glutaraldehyde
C5H8O2)，戊二醛的優(yōu)點(diǎn)是對(duì)糖原、糖蛋白、微管、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和細(xì)胞基質(zhì)等有較好的固定作用，對(duì)組織和細(xì)胞的穿透力比強(qiáng)，還能保存某些酶的活力，長(zhǎng)時(shí)間的固定(幾周甚至1～2個(gè)月)不會(huì)使組織變脆。缺點(diǎn)是不能保存脂肪，沒有電子染色作用，對(duì)細(xì)胞膜的顯示較差。
組織塊固定常規(guī)采用戊二醛—雙重固定法。分預(yù)固定和后固定，中間用磷酸緩沖液漂洗。前固定用2.5%戊二醛固定2小時(shí)以上、后固定用1%固定液固定1～2小時(shí)，pH7.3～7.4。
固定完畢，用緩沖液漂洗20分鐘后進(jìn)行脫水。
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