潮霉素B（液體）英文名稱 : Hygromycin B CAS : 31282-04-9 分子式 : C20H37N3O13 分子量 : 527.52 儲存條件 : 2-8℃ 危險(xiǎn)代碼 : R：26/27/28-41-42/43 S：22-26-28-36/37/39-45 外觀（性狀） : 澄清或輕微渾濁黃色溶液 單位 : 瓶

潮霉素B（液體）

• 別名 : Hygromix ； O-6-Amino-6-deoxy-L-glycero-D-galactoh e p t o p y r a n o s y l i d e ne-(1-2-3)-O-β-Dtalopyranosyl- (1-5)-2-deoxy -N3-methyl-D-streptamine，潮霉素B溶液 潮霉素B85+% 潮霉素B98+% 濕霉素乙 效高素
• 英文名稱 : Hygromycin B
• CAS : 31282-04-9
• 分子式 : C20H37N3O13
• 分子量 : 527.52
• 儲存條件 : 2-8℃
• 危險(xiǎn)代碼 : R：26/27/28-41-42/43 S：22-26-28-36/37/39-45
• 外觀（性狀） : 澄清或輕微渾濁黃色溶液
• 單位 : 瓶
• 蛋白質(zhì)合成抑制劑，可用于植物細(xì)胞培養(yǎng)等生化研究。
  潮霉素B（Hygromycin B）是由吸水鏈霉菌（Streptomyces hygroscopicus）代謝產(chǎn)生的一種氨基糖苷類抗生素，通過干擾70S核糖體易位和誘導(dǎo)對mRNA模板的錯(cuò)讀而抑制蛋白合成，從而殺死原核（如細(xì)菌）、真核（如酵母菌，真菌）和高等哺乳動(dòng)物真核細(xì)胞。
  大腸桿菌（ Escherichia coli.）來源的潮霉素抗性基因（hyg或hph），編碼潮霉素B磷酸轉(zhuǎn)移酶，將潮霉素B轉(zhuǎn)化成不具有生物活性的磷酸化產(chǎn)物，從而起到解毒作用。針對這一原理，潮霉素B是一種非常有用的選擇性標(biāo)記，用來篩選和維持培養(yǎng)成功轉(zhuǎn)染潮霉素抗性基因的原核或者真核細(xì)胞。另外，由于作用模式的差異，常與G418 (Cat：G8161)，Zeocin（Cat：Z8020）和Blasticidin S（Cat：B9300）聯(lián)合使用進(jìn)行雙抗性陽性細(xì)胞株的選擇。潮霉素B還能用作抗病毒劑，因其選擇性滲透進(jìn)入感染增強(qiáng)通透性的細(xì)胞，且具有抑制翻譯的功效。還可混合入動(dòng)物飼料中起到驅(qū)蟲功能。
  本品是無菌的潮霉素B溶液（100mg/ml），可直接用培養(yǎng)液稀釋使用。
•  潮霉素B（液體）

  使用方法

  1.  常用篩選濃度

  注意：潮霉素B用來篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株的工作濃度需要根據(jù)細(xì)胞類型，培養(yǎng)基，生長條件和細(xì)胞代謝率而變化，推薦使用濃度為50-1000μg/mL。對于*次使用的實(shí)驗(yàn)體系建議通過建立殺滅曲線（kill curve），即劑量反應(yīng)性曲線，來確定篩選濃度。

  一般而言，哺乳動(dòng)物細(xì)胞50-500μg/mL；細(xì)菌/植物細(xì)胞20-200μg/mL；真菌300-1000μg/mL。

  2. 殺滅曲線的建立

  注意：為了篩選得到穩(wěn)定表達(dá)目的蛋白的細(xì)胞株，需要確定能夠殺死未轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞的抗生素低濃度，可通過建立殺滅曲線（劑量反應(yīng)曲線）來實(shí)現(xiàn)，至少選擇5個(gè)濃度。

  1）  *天：未轉(zhuǎn)化的細(xì)胞按照20-25%的細(xì)胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上，37℃，CO2培養(yǎng)過夜；注：對于需要更高密度來檢測活力的細(xì)胞，可增加接種量。

  2）  根據(jù)細(xì)胞類型，設(shè)定合適范圍內(nèi)的濃度梯度。以哺乳動(dòng)物細(xì)胞為例，可設(shè)定50，100，250，500，750，1000μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml，然后按照下表稀釋到相應(yīng)濃度的工作液。

  終濃度（μg/mL）	培養(yǎng)基體積（ml）	5mg/ml潮霉素B加入體積（ml）
  50	9.9	0.1
  100	9.8	0.2
  250	9.5	0.5
  500	9.0	1.0
  750	8.5	1.5
  1000	8.0	2.0

  3）  第二天：替換舊的培養(yǎng)基，換用新鮮配制的含有相應(yīng)濃度藥物的培養(yǎng)基。每個(gè)濃度做三個(gè)平行孔。

  4）  接下來每3-4天更換新的含藥物培養(yǎng)基。

  5）  按照固定的周期（如每2天）進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù)來確定阻止未轉(zhuǎn)染細(xì)胞生長的恰當(dāng)濃度。選擇在理想的天數(shù)（通常是7-10天）內(nèi)能夠殺死絕大多數(shù)細(xì)胞的低濃度為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞篩選用的工作濃度。

  3.   穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞的篩選

  1）     轉(zhuǎn)染48h后，用含有適當(dāng)濃度的潮霉素B篩選培養(yǎng)基來傳代細(xì)胞（直接傳代或者稀釋后傳代）。

  注意：細(xì)胞處于活躍分裂狀態(tài)時(shí)抗生素的殺傷效果。則當(dāng)細(xì)胞過于稠密，其效率會降低。為了得到較好的篩選效果，將細(xì)胞稀釋至豐度不超過25%。

  2） 每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液。

  3）  篩選7天后觀察并評估細(xì)胞克?。洌┑男纬汕闆r。集落的形成可能還需要一周或者更多的時(shí)間，這取決于宿主細(xì)胞類型，轉(zhuǎn)染，以及篩選效果。

  4） 挑取并轉(zhuǎn)移5-10個(gè)抗性克隆于35mm細(xì)胞培養(yǎng)板，繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天。

  5） 之后更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可。

  注意事項(xiàng)

  1） 潮霉素B的抗性基因（hyg或hph）除了來自E. Coli.之外，還發(fā)現(xiàn)于其他的菌株，包括Streptomyces hygroscopicus和Klebsiella pneumoniae。

  2） 本品為有毒化合物，避免與皮膚和眼睛接觸，請小心操作。

  3） 為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。