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單細(xì)胞全基因組擴(kuò)增試劑盒（PLEX）
單細(xì)胞全基因組擴(kuò)增試劑盒（PLEX）
【產(chǎn)品名稱】 通用名稱：單細(xì)胞全基因組擴(kuò)增試劑盒。 【包裝規(guī)格】 96 rxns。 【預(yù)期用途】 用于單細(xì)胞或微量樣本中 DNA 的提取和全基因組擴(kuò)增步驟， 擴(kuò)增產(chǎn)物可應(yīng)用用于熒光 PCR、高通量測序、芯片等技術(shù)平臺(tái)。 【檢驗(yàn)原理】 本試劑盒采用特殊引物多重退火成環(huán)擴(kuò)增技術(shù)，實(shí)現(xiàn)單個(gè)細(xì)胞 全基因組高穩(wěn)健和可重復(fù)的擴(kuò)增，獲得的擴(kuò)增產(chǎn)物可應(yīng)用于 PCR 方法、芯片方法、或高通量測序方法，快速實(shí)現(xiàn)對單個(gè)細(xì)胞的全基 因組序列分析。 【主要組分】 試劑 24 rxns 48 rxns 96 rxns 細(xì)胞裂解緩沖液 122μL 243μL 485μL 細(xì)胞裂解酶稀釋液 122μL 243μL 485μL 細(xì)胞裂解酶 5μL 10μL 20μL 預(yù)擴(kuò)增緩沖液 122μL 243μL 485μL 預(yù)擴(kuò)增酶 5μL 10μL 20μL 擴(kuò)增緩沖液 650μL 1300μL 2600μL 擴(kuò)增酶 20μL 40μL 80μL 無核酸酶水 1000μL 2000μL 4000μL 【適用儀器】 普通分子實(shí)驗(yàn)所需的常規(guī)儀器設(shè)備。 【儲(chǔ)存條件及有效期】 試劑盒置于-20℃（±5℃）下條件，有效期為 12 個(gè)月。 【自備試劑】 無核酸酶水、PBS 緩沖液、純化磁珠等。 【注意事項(xiàng)】 不同批次產(chǎn)品禁止混用。 【樣本要求】 本試劑盒適用于多種類型樣本的全基因組擴(kuò)增，包括基因組 DNA、血細(xì)胞、組織、微生物等。 【使用前準(zhǔn)備】 1. 為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。 2. 請于使用前將試劑盒各組分置于室溫解凍。解凍后上下顛倒數(shù) 次充分混勻，短暫離心后置于冰上待用。 3. 為避免樣品交叉污染，推薦使用帶濾芯的槍頭，吸取不同樣品 時(shí)請更換槍頭。 【實(shí)驗(yàn)步驟】 I 細(xì)胞裂解 1. 按照下表配制細(xì)胞裂解反應(yīng)體系， 組分 體積 單細(xì)胞樣本 2.5μL 細(xì)胞裂解緩沖液 2.5μL 細(xì)胞裂解酶稀釋液 4.8μL 細(xì)胞裂解酶 0.2μL 2. 瞬時(shí)離心后，置于 PCR 儀器運(yùn)行程序： 循環(huán) 溫度 時(shí)間 1 75℃ 10min 1 95℃ 4min 1 22℃ ∞ II 預(yù)擴(kuò)增反應(yīng) 1. 按照下表配制預(yù)擴(kuò)增反應(yīng)體系， 組分 體積 上一步產(chǎn)物 10μL 預(yù)擴(kuò)增緩沖液 4.8μL 預(yù)擴(kuò)增酶 0.2μL 2. 瞬時(shí)離心后，置于 PCR 儀器運(yùn)行程序： 循環(huán) 溫度 時(shí)間 1 95℃ 2min 12 95℃ 15sec 15℃ 50sec 25℃ 40sec 35℃ 30sec 65℃ 40sec 75℃ 40sec 1 4℃ ∞ III 擴(kuò)增反應(yīng) 1. 按照下表配制擴(kuò)增反應(yīng)體系， 組分 體積 上一步產(chǎn)物 15μL 無核酸酶水 34.2μL 擴(kuò)增緩沖液 25μL 擴(kuò)增酶 0.8μL 2. 瞬時(shí)離心后，置于 PCR 儀器運(yùn)行程序： 循環(huán) 溫度 時(shí)間 1 95℃ 2min 14 95℃ 15sec 65℃ 1min 75℃ 1min 1 4℃ ∞ IV 產(chǎn)物處理 1. 保存方法：若擴(kuò)增產(chǎn)物暫時(shí)不使用，可以保存于-20℃。 2. 純化方法：可以使用 1~1.5×純化磁珠進(jìn)行純化。 3. 定量方法： 可以使用 Qubit 進(jìn)行產(chǎn)物定量，不可使用 Nanodrop 定量。 4. 產(chǎn)量：使用基于特異性識別雙鏈 DNA 的熒光染料法進(jìn)行測定(如 Qubit 等)：單細(xì)胞全基因組擴(kuò)增產(chǎn)物產(chǎn)量≥ 1μg
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