1,4-α-D-葡聚糖-葡萄糖水解酶

1,4-α-D-葡聚糖-葡萄糖水解酶

慢病毒感染快速指南

1. 將目的細(xì)胞按 30%匯合度接種到 24 孔板，約 3-5×104細(xì)胞數(shù)/孔，不同細(xì)胞因?yàn)榧?xì)胞大小不同細(xì)胞數(shù)量會(huì)不同，快速指南以細(xì)胞數(shù)量為 5×104為例，加入 500uL wan全培養(yǎng)基進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)。

2. 接種后 12-20h 感染陰性對(duì)照慢病毒（接種細(xì)胞至病毒感染細(xì)胞時(shí)間不宜太長(zhǎng)，否則細(xì)胞增殖影響細(xì)胞密度不利用后期抗性篩選）。

3.加病毒量計(jì)算方法：（細(xì)胞數(shù)×MOI 值/病毒滴度）×103=病毒量（uL），加病毒量見(jiàn)下表。同時(shí)加入 Polybrene，每孔加 0.25uL，濃度為 10mg/mL Polybrene，細(xì)胞培養(yǎng)液中終濃度為5ug/mL。

4.感染 16-20h 后更換培養(yǎng)基，棄去培養(yǎng)基，每孔加入 500uL 新鮮的培養(yǎng)基。

5.感染后 48-96h 顯微鏡觀察熒光。（注：如果 48h-96h 期間細(xì)胞匯合度達(dá)到 100%，請(qǐng)及時(shí)傳代培養(yǎng)）。

6.建議將 48 孔板細(xì)胞進(jìn)行傳代，傳代 12 孔板，后繼續(xù)觀察熒光，根據(jù)細(xì)胞狀態(tài)和熒光細(xì)胞比例綜合判斷細(xì)胞感染最佳 MOI 值。一般選擇細(xì)胞生長(zhǎng)良好，感染效率 80%左右的感染條件作為最佳感染條件。（注：100%熒光感染不一定為細(xì)胞最佳 MOI 值，因?yàn)榭赡軙?huì)造成細(xì)胞慢病毒感染拷貝數(shù)太高，影響細(xì)胞狀態(tài)。