Assay Genie脂肪酸氧化檢測(cè)試劑盒是一種高靈敏度的比色法檢測(cè)試劑盒，用于定量檢測(cè)細(xì)胞和組織中的脂肪酸氧化。這種特別的檢測(cè)方法使用了高溶解性的辛酰輔酶A（Octanoyl-CoA）底物，能夠比長(zhǎng)鏈且溶解性較差的底物（例如18碳不飽和脂肪酸油酸）更準(zhǔn)確地測(cè)量脂肪酸氧化。

作為Assay Genie全國(guó)總代理，艾美捷科技強(qiáng)烈推薦Assay Genie銷售產(chǎn)品脂肪酸氧化（FAO）檢測(cè)試劑盒。產(chǎn)品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

脂肪酸氧化（FAO）檢測(cè)試劑盒：

產(chǎn)品名稱：脂肪酸氧化檢測(cè)  

貨號(hào)：BR00001  

應(yīng)用范圍：定量檢測(cè)細(xì)胞和組織中的脂肪酸氧化。  

注意事項(xiàng)：僅供研究使用。

細(xì)胞/組織提取物的制備

步驟| 操作  

步驟1| 用冰冷的磷酸鹽緩沖液（PBS）洗滌約10?個(gè)細(xì)胞兩次，并w全去除細(xì)胞沉淀中的PBS。細(xì)胞沉淀應(yīng)保存在-80℃。組織樣本應(yīng)c底用PBS洗滌以去除可能引起結(jié)果不一致的血細(xì)胞。  

步驟2| 用冰冷的去離子水（dH?O）稀釋10倍細(xì)胞裂解液，制備足夠的1倍細(xì)胞裂解液。向細(xì)胞沉淀中加入50-100微升冰冷的1倍細(xì)胞裂解液，通過(guò)上下移液（輕柔但c底）提取細(xì)胞。將裂解液置于冰上，間歇性輕柔振蕩5分鐘。如果裂解液黏稠，可加入更多1倍細(xì)胞裂解液并重復(fù)移液。在低溫離心機(jī)中以最大速度離心裂解液5分鐘，收集上清液用于檢測(cè)。組織樣本在1倍細(xì)胞裂解液中勻漿，并通過(guò)離心澄清裂解液。每0.5毫升1倍細(xì)胞裂解液用于勻漿約25毫克組織。  

步驟3| 進(jìn)行蛋白定量檢測(cè)以確定樣本蛋白濃度。通過(guò)用冰冷的1倍細(xì)胞裂解液稀釋，將樣本蛋白濃度調(diào)整至1-3毫克/毫升。始終將蛋白樣本保存在冰上。凍融后的粗蛋白裂解液可能會(huì)降低酶活性。裂解液應(yīng)保存在-80℃。

注意：不要使用含有還原劑或SDS的緩沖液。

試劑解凍

將解凍后的脂肪酸氧化（FAO）檢測(cè)液和20倍FAO底物置于冰上。在移液前輕輕振蕩溶液。盡量減少試劑解凍的時(shí)間，使用后立即冷凍保存。

對(duì)照液和反應(yīng)液的制備

-對(duì)照液：將1份去離子水（dH?O）與20份FAO檢測(cè)液混合，例如25微升去離子水與500微升FAO檢測(cè)液混合。檢測(cè)過(guò)程中將新制備的對(duì)照液置于冰上保存。  

-反應(yīng)液：將1份20倍FAO底物與20份FAO檢測(cè)液混合，例如25微升20倍FAO底物與500微升FAO檢測(cè)液混合。將溶液置于冰上并立即使用。每個(gè)蛋白樣本分別用50微升對(duì)照液和50微升反應(yīng)液處理。

試劑盒描述  

脂肪酸提供的ATP比碳水化合物（如葡萄糖）更多。在能量需求高的組織（如心臟組織）中，高達(dá)50-70%的能量來(lái)自脂肪酸β-氧化，該過(guò)程將脂肪酸轉(zhuǎn)化為乙酰輔酶A，同時(shí)在線粒體中產(chǎn)生FADH?和NADH。

這種嚴(yán)格的需氧氧化途徑包括四個(gè)不同的步驟：  

1. 由?；o酶A脫氫酶催化的?；o酶A脫氫反應(yīng)；  

2. 由烯酰輔酶A水合酶催化的水合反應(yīng)；  

3. 由3-羥基酰基輔酶A脫氫酶催化的脫氫反應(yīng)；  

4. 由β-酮硫解酶催化的硫解反應(yīng)。

脂肪酸β-氧化系統(tǒng)在人類中的重要性體現(xiàn)在存在一組遺傳性疾病，稱為脂肪酸氧化障礙（FAODs）。這是一組脂肪酸轉(zhuǎn)運(yùn)和氧化缺陷的異質(zhì)性疾病，以常染色體隱性方式遺傳，具有廣泛的臨床表現(xiàn)。

證據(jù)表明，胎兒發(fā)育過(guò)程中脂肪酸氧化（FAO）活性的調(diào)節(jié)不僅對(duì)胎兒生命至關(guān)重要，還對(duì)成年期的健康和疾病有影響。脂肪酸氧化活性的測(cè)量為許多疾病的病理生理學(xué)和代謝基礎(chǔ)提供了寶貴的見(jiàn)解。

Assay Genie的非放射性脂肪酸氧化檢測(cè)基于辛酰輔酶A底物的氧化。NADH的生成與四氮雜唑鹽INT的還原偶聯(lián)，形成紅色的甲臜。紅色甲臜的強(qiáng)度與脂肪酸氧化活性的增加成正比。

檢測(cè)液和底物應(yīng)分裝后保存在-80℃。

Assay Genie旗下涵蓋了15種種屬的高品質(zhì)的ELISA試劑盒及多種抗體，可檢測(cè)的指標(biāo)種類豐富，覆蓋免疫、代謝和分子等多種研究領(lǐng)域，是科學(xué)研究中便捷的小助手。  

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