噬斑測定法于1952年開發(fā)，是第一個用于定量病毒濃度的方法。該方法由Renato Dulbecco改進(jìn)，允許手動確定含有具有復(fù)制能力的溶菌性病毒顆粒的樣本中的噬斑形成單位（PFU）數(shù)量。

噬斑測定需要使用對目標(biāo)病毒易感的培養(yǎng)細(xì)胞。細(xì)胞首先被接種到一個可以附著和生長的表面上，然后過夜培養(yǎng)以形成完整的單層細(xì)胞。隨后，將病毒樣本進(jìn)行多次稀釋，并將每個稀釋度的樣本加入到細(xì)胞的培養(yǎng)皿或孔中。經(jīng)過一段孵育期，病毒附著到目標(biāo)細(xì)胞上后，移除接種液。然后，培養(yǎng)物被覆蓋一層含有營養(yǎng)物質(zhì)的培養(yǎng)基，以及一種能夠形成凝膠或半固體覆蓋層的物質(zhì)，如瓊脂糖或甲基纖維素。進(jìn)入細(xì)胞并復(fù)制的感染性病毒顆粒可以觸發(fā)子代病毒顆粒的釋放。凝膠限制了顆粒的運動，使得新產(chǎn)生的病毒只能感染鄰近的細(xì)胞。當(dāng)病毒殺死感染的細(xì)胞時，死亡（或垂死）的細(xì)胞會脫落，從而在細(xì)胞單層中形成一個孔洞。這個細(xì)胞缺失的區(qū)域稱為噬斑，表現(xiàn)為生長表面上的圓形斑點。

Cell Biolabs的病毒噬斑測定試劑盒提供了一個準(zhǔn)確的系統(tǒng)，用于測定溶菌性病毒的感染性滴度。試劑盒提供的試劑足以在12孔板中進(jìn)行最多120次滴定實驗。

作為Cell Biolabs全國總代理，艾美捷科技強(qiáng)烈推薦Cell Biolabs熱銷產(chǎn)品病毒斑檢測試劑盒。產(chǎn)品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

病毒斑檢測試劑盒檢測原理：

第一天：在12孔或6孔板中接種細(xì)胞  

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第二天：用目標(biāo)病毒的系列稀釋液感染細(xì)胞，并添加覆蓋培養(yǎng)基。在顯微鏡下觀察噬斑的形成  

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第四天至第十六天：固定和染色細(xì)胞  

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計數(shù)陽性噬斑并計算病毒滴度  

相關(guān)產(chǎn)品

1. VPK-5170：RSV融合蛋白ELISA試劑盒  

2. VPK-5174：流感A型核蛋白ELISA試劑盒  

3. VPK-5175：流感B型核蛋白ELISA試劑盒  

4. VPK-5189：流感A型免疫噬斑測定試劑盒  

5. VPK-5190：流感B型免疫噬斑測定試劑盒  

試劑盒組成（常溫運輸）

1. CytoSelect?瓊脂粉（部件號113001）：一瓶1.2克  

2. 10倍固定液（部件號51911A）：一瓶20毫升  

3. 細(xì)胞染色液（部件號51912A）：一瓶30毫升  

未提供材料

1. 目標(biāo)細(xì)胞和病毒  

2. 2倍細(xì)胞培養(yǎng)基和無菌DPBS  

3. 無菌細(xì)胞培養(yǎng)級水  

4. 微波爐或加熱塊  

5. 水浴鍋  

6. 顯微鏡  

保存方法

將所有試劑盒組分保存在室溫下。

結(jié)果示例

以下圖表展示了典型的滴定結(jié)果。以下數(shù)據(jù)僅供參考，不應(yīng)用于解釋實際結(jié)果。

圖：流感A型和B型病毒在MDCK細(xì)胞中的噬斑測定  

使用不同稀釋度的流感A型（A面板）和B型（B面板）病毒培養(yǎng)液感染MDCK細(xì)胞72小時。

文獻(xiàn)參考：

1. Baer, A. & Kehn-Hall, K. (2014) Viral concentration determination through plaque assays: using traditional and novel overlay systems. J. Vis. Exp. 93, 52065.

2. Wen, Z. et al. (2019) Development and application of a higher throughput RSV plaque assay by immunofluorescent imaging. J. Virol. Methods 263, 88–95.

3. Mendoza, E. J., Manguiat, K., Wood, H. & Drebot, M. (2020) Two detailed plaque assay protocols for the quantification of infectious SARS-CoV-2. Curr. Protoc. Microbiol. 57, cpmc105.

4. Blaho, J. A., Morton, E. R. & Yedowitz, J. C. (2006) Herpes simplex virus: propagation,quantification, and storage. Curr. Protoc. Microbiol. 14, E.1.1–E.1.23.

5. Cruz, D. J. M. & Shin, H.-J. (2007) Application of a focus formation assay for detection and titration of porcine epidemic diarrhea virus. J. Virol. Methods 145, 56–61.

Cell Biolabs公司位于美國加利福尼亞州南部重要的工業(yè)城市圣迭戈（San Diego），是有名的細(xì)胞學(xué)試劑品牌，作為前沿的細(xì)胞學(xué)分析檢測試劑盒生產(chǎn)商，為生物技術(shù)和研究類客戶提供好的基于細(xì)胞功能研究以及疾病等方面的g端產(chǎn)品和技術(shù)服務(wù)。產(chǎn)品主要涵蓋細(xì)胞研究、細(xì)胞信號通路和蛋白質(zhì)生物學(xué)、代謝研究、病原體和毒素、干細(xì)胞研究等領(lǐng)域。全球眾多大學(xué)、政府研究機(jī)構(gòu)、生物、制藥企業(yè)的科研實驗室均在使用Cell Biolabs的產(chǎn)品。  

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