重組腺病毒在研究和治療應(yīng)用中具有巨大的潛力。在將遺傳物質(zhì)引入宿主細(xì)胞時(shí)，它們提供了許多優(yōu)勢(shì)。其允許的宿主細(xì)胞范圍非常廣泛。該病毒已被用于感染許多哺乳動(dòng)物細(xì)胞類型（包括增殖性和非增殖性細(xì)胞），以實(shí)現(xiàn)重組蛋白的高效表達(dá)。重組腺病毒特別適用于那些通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染效率較低的細(xì)胞系中的基因轉(zhuǎn)移和蛋白表達(dá)。病毒進(jìn)入細(xì)胞后，保持染色體外存在（即不整合到宿主染色體中，因此不會(huì)激活或失活宿主基因）。最近，重組腺病毒已被用于將RNA干擾（RNAi）傳遞到細(xì)胞中。

HEK 293細(xì)胞及其變體被用作病毒擴(kuò)增的宿主細(xì)胞。重組腺病毒可以在高滴度下生長（10??病毒顆粒/mL，可濃縮至10??病毒顆粒/mL），并可通過Cell Biolabs的ViraBind?腺病毒純化試劑盒或傳統(tǒng)的CsCl超速離心法進(jìn)行純化。

病毒載體傳遞基因的一個(gè)特殊挑戰(zhàn)是準(zhǔn)確測(cè)量病毒滴度。傳統(tǒng)上，通過培養(yǎng)中的噬菌斑形成單位（PFU）測(cè)定感染性顆粒，該方法根據(jù)稀釋度計(jì)算病毒噬菌斑的數(shù)量。這些方法耗時(shí)（10天），需要較長的感染期，并且存在高度的實(shí)驗(yàn)間變異性和受病毒-細(xì)胞相互作用的影響。Cell Biolabs的QuickTiter?腺病毒滴度免疫測(cè)定試劑盒利用針對(duì)腺病毒六鄰體蛋白的抗體，通過免疫細(xì)胞化學(xué)染色觀察感染細(xì)胞。六鄰體蛋白是腺病毒衣殼中最大且豐富的結(jié)構(gòu)蛋白，它們對(duì)稱分布以形成衣殼的面。

Cell Biolabs的QuickTiter?腺病毒滴度免疫測(cè)定試劑盒提供了一種快速且完整的系統(tǒng)，用于測(cè)定病毒的感染性滴度。該試劑盒提供的試劑足以在24孔板中進(jìn)行多達(dá)100次滴定。與經(jīng)典的噬菌斑測(cè)定法所需的10天感染期相比，該試劑盒僅需2天感染期。試劑盒中的六鄰體蛋白抗體通過免疫細(xì)胞化學(xué)識(shí)別所有41種腺病毒血清型，只要病毒能夠在HEK 293細(xì)胞中擴(kuò)增，就可以與任何腺病毒系統(tǒng)配合使用。

作為Cell Biolabs全國總代理，艾美捷科技強(qiáng)烈推薦Cell Biolabs熱銷產(chǎn)品QuickTiter 腺病毒滴度免疫測(cè)定成套工具。產(chǎn)品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

QuickTiter 腺病毒滴度免疫測(cè)定成套工具檢測(cè)原理：

1. 在24孔或12孔板中接種293細(xì)胞，孵育1小時(shí)  

↓  

2. 準(zhǔn)備腺病毒系列稀釋液，并感染293細(xì)胞48小時(shí)  

↓  

3. 進(jìn)行抗六鄰體蛋白免疫細(xì)胞化學(xué)染色  

↓  

4. 計(jì)數(shù)陽性細(xì)胞并計(jì)算病毒滴度  

相關(guān)產(chǎn)品

1. AD-100：293AD細(xì)胞系  

2. AD-200：ViraDuctin?腺病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)試劑  

3. VPK-106：QuickTiter?腺病毒定量試劑盒  

4. VPK-110：QuickTiter?腺病毒滴度ELISA試劑盒  

5. VPK-111：快速RCA檢測(cè)試劑盒  

6. VPK-252：RAPAd? CMV腺病毒表達(dá)系統(tǒng)  

7. VPK-099：ViraBind?腺病毒小柱純化試劑盒  

8. VPK-112：QuickTiter?慢病毒定量試劑盒  

9. VPK-120：QuickTiter?逆轉(zhuǎn)錄病毒定量試劑盒  

試劑盒組成（干冰運(yùn)輸）

1. 抗六鄰體蛋白抗體（1000倍稀釋）（部件編號(hào)10901）：一支30 ?L的管  

2. 二抗，HRP偶聯(lián)物（1000倍稀釋）（部件編號(hào)10902）：一支50 ?L的管  

3. DAB底物（25倍稀釋）（部件編號(hào)10903）：一支1.5 mL的管  

4. 稀釋液（10倍稀釋）（部件編號(hào)10905）：一瓶4.5 mL  

5. Ad-β-gal陽性對(duì)照（部件編號(hào)10904）：一支50 ?L的管，濃度為1.0×10? IFU/mL  

未提供材料

1. 感興趣的重組腺病毒  

2. HEK 293細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)生長培養(yǎng)基  

3. 甲醇  

4. 1% BSA/PBS  

5. H?O?  

6. 光學(xué)顯微鏡  

7. （可選）β-半乳糖苷酶染色試劑盒（貨號(hào)AKR-100）  

保存方法

收到后，將Ad-β-gal陽性對(duì)照保存在-80℃。將試劑盒中的其他組分保存在4℃。

結(jié)果示例

以下圖表展示了典型的滴定結(jié)果。以下數(shù)據(jù)僅供參考，不應(yīng)用于解釋實(shí)際結(jié)果。

圖：Ad-β-gal滴定。** 使用不同稀釋度的Ad-β-gal陽性對(duì)照感染HEK 293細(xì)胞48小時(shí)。按照檢測(cè)說明進(jìn)行抗六鄰體蛋白免疫染色，并使用β-半乳糖苷酶染色試劑盒（貨號(hào)AKR-100）進(jìn)行X-gal染色。

文獻(xiàn)參考：

1. Hickey, J.M. et al. (2022). Measurement of Adenovirus-Based Vector Heterogeneity. J Pharm Sci.doi: 10.1016/j.xphs.2022.12.012.

2. Sonugür, F.G. et al. (2022). Incubation Temperature and Period During Denarase Treatment and Microfiltration Affect the Yield of Recombinant Adenoviral Vectors During Downstream Processing. Mol Biotechnol. doi: 10.1007/s12033-022-00616-8.

3. Nie, J. et al. (2022). Optimization of an adenovirus-vectored zoster vaccine production process with chemically defined medium and a perfusion system. Biotechnol Lett. doi: 10.1007/s10529-022-03302-6.

4. Padron-Regalado, E. et al. (2022). STING-pathway modulation to enhance the immunogenicity of adenoviral-vectored vaccines. Sci Rep. 12(1):14464. doi: 10.1038/s41598-022-18750-3.

Cell Biolabs公司位于美國加利福尼亞州南部重要的工業(yè)城市圣迭戈（San Diego），是有名的細(xì)胞學(xué)試劑品牌，作為前沿的細(xì)胞學(xué)分析檢測(cè)試劑盒生產(chǎn)商，為生物技術(shù)和研究類客戶提供好的基于細(xì)胞功能研究以及疾病等方面的g端產(chǎn)品和技術(shù)服務(wù)。產(chǎn)品主要涵蓋細(xì)胞研究、細(xì)胞信號(hào)通路和蛋白質(zhì)生物學(xué)、代謝研究、病原體和毒素、干細(xì)胞研究等領(lǐng)域。全球眾多大學(xué)、政府研究機(jī)構(gòu)、生物、制藥企業(yè)的科研實(shí)驗(yàn)室均在使用Cell Biolabs的產(chǎn)品。  

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