IL-6響應型熒光素酶報告基因HEK293細胞系是一種設(shè)計用于監(jiān)測IL-6（白細胞介素6）/IL-6受體相互作用的HEK293細胞系。這些細胞表達內(nèi)源性IL-6受體（IL-6R和gp130），并被工程化以在STAT響應元件的控制下表達螢火蟲熒光素酶（圖1）。

該細胞系已驗證對人類白細胞介素-6（IL-6）、IL-27有反應，進一步的功能驗證實驗表明，IL-6誘導的熒光素酶活性可被JAK抑制劑CP 690,550和抗IL-6R中和抗體降低。

背景

IL-6（白細胞介素-6）在炎癥發(fā)生時迅速產(chǎn)生，通過刺激急性期反應、造血和免疫反應，在宿主防御中發(fā)揮關(guān)鍵作用。IL-6通過作用于STAT3（信號轉(zhuǎn)導及轉(zhuǎn)錄激活因子3）信號通路，對T細胞和B細胞產(chǎn)生刺激效應。

IL-6表達失調(diào)對慢性炎癥、自身免疫和癌癥具有b理效應。Il-6的表達在多個層面上受到調(diào)節(jié)，轉(zhuǎn)錄由多種刺激因素誘導，如TLR（Toll樣受體）配體、TNFα（腫瘤壞死因子α）和ROS（活性氧）。IL-6還涉及細胞衰老，并能觸發(fā)衰老引起的炎癥和與年齡相關(guān)的疾病。使用抗IL-6R抗體托珠單抗在治療RA（類風濕性關(guān)節(jié)炎）和Castleman病中取得了積極成果。因此，開發(fā)能夠靶向IL-6和IL-6信號通路的分子是一個活躍的研究領(lǐng)域，可以作為預防和治療慢性炎癥性疾病和癌癥的有效策略。

圖1：IL-6響應型熒光素酶報告基因HEK293細胞系背后報告基因表達機制的示意圖。

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應用

? 監(jiān)測IL-6活性。

? 研究化合物對IL-6/IL-6R介導的信號通路的影響。

? 篩選抗IL-6或抗IL-6R抗體。

細胞培養(yǎng)協(xié)議

注意：HEK293細胞源自人類材料，因此建議采取適當?shù)陌踩A防措施。

細胞解凍

1. 在37°C水浴中搖晃裝有冷凍細胞的小瓶大約60秒。細胞解凍后（可能比60秒稍快或稍慢），迅速將小瓶的全部內(nèi)容轉(zhuǎn)移到含有10 ml預熱的解凍培養(yǎng)基1的試管中。在37°C水浴中放置細胞過久將導致活性迅速喪失。

2. 立即以300 x g的速度離心細胞5分鐘，去除培養(yǎng)基并將細胞在5 ml預熱的解凍培養(yǎng)基1中重懸。

3. 將重懸的細胞轉(zhuǎn)移到T25或T75培養(yǎng)瓶中，并在37°C、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

4. 培養(yǎng)24小時后，檢查細胞附著和活性。更換培養(yǎng)基為新鮮的解凍培養(yǎng)基1，并繼續(xù)在37°C、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，直到細胞準備好傳代。

5. 細胞應在w全融合前傳代。在s次傳代及后續(xù)傳代中，使用生長培養(yǎng)基1N。

細胞傳代

1. 抽去培養(yǎng)基，用無Ca2+/Mg2+的磷酸鹽緩沖液（PBS）沖洗細胞，并用0.05% y酶/EDTA從培養(yǎng)容器中分離細胞。

2. 一旦細胞分離，加入生長培養(yǎng)基1N并轉(zhuǎn)移到試管中。

3. 以300 x g的速度離心細胞5分鐘，去除培養(yǎng)基并將細胞在生長培養(yǎng)基1N中重懸。

4. 按照推薦的亞培養(yǎng)比例1:5至1:10，每周一次或兩次將細胞種入新的培養(yǎng)容器中。

細胞冷凍

1. 抽去培養(yǎng)基，用無Ca2+/Mg2+的PBS沖洗細胞，并用0.05% y酶/EDTA從培養(yǎng)容器中分離細胞。

2. 一旦細胞分離，加入生長培養(yǎng)基1N并計數(shù)細胞。

3. 以300 x g的速度離心細胞5分鐘，去除培養(yǎng)基并將細胞在4°C冷凍培養(yǎng)基（BPS Bioscience #79796）中重懸，細胞濃度約為1 x 10^6個細胞/ml。

4. 將1 ml的細胞懸浮液分裝到每個冷凍小瓶中。將小瓶放入保溫容器中緩慢冷卻，并在-80°C下保存過夜。

5. 次日將小瓶轉(zhuǎn)移到液氮中長期保存。

注意：建議在早期傳代時擴增細胞并至少冷凍10個小瓶以備將來使用。

圖：IL-6響應型熒光素酶報告基因HEK293細胞系對人類IL-27的劑量反應曲線。

IL-6響應型熒光素酶報告基因HEK293細胞與不同濃度的人類IL-27共培養(yǎng)過夜，并使用One-Step?熒光素酶檢測系統(tǒng)測量熒光素酶活性。結(jié)果以熒光素酶報告基因表達的誘導倍數(shù)顯示（與未刺激的細胞相比）。

文獻參考：

Tanaka T., et al., 2014, Cold Spring Harb Perspect Biol. 6(10):a016295.

Choy EH., et al., 2020, Nature Rev Rheumatol. 16:335-345.

Hirano T., 2021 International Immunology 33(3):127-148.

BPS Bioscience是一家通過ISO 9001:2015認證的生命科學領(lǐng)域的供應商，公司一直致力于開發(fā)藥物研發(fā)領(lǐng)域的重組蛋白酶、蛋白酶活性/抑制劑篩選試劑盒和慢病毒等工具。公司由Henry Zhu博士于2005年創(chuàng)立，從創(chuàng)立至今一直致力于提供藥物研發(fā)領(lǐng)域的創(chuàng)新解決方案，以推動新的藥物發(fā)現(xiàn)。公司主要關(guān)注的領(lǐng)域包括免疫療法、表觀遺傳學、CRISPR、細胞信號轉(zhuǎn)導等，主要提供激酶、磷酸二酯酶、磷酸酶、組蛋白去甲基化酶、組蛋白甲基化轉(zhuǎn)移酶、HDACs、聚ADP核糖聚合酶等。 

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