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產(chǎn)品名稱：輔酶ⅠNAD(H)含量可見(jiàn)分光光度法測(cè)試盒

規(guī)格 : 50管/24樣

測(cè)試方法:可見(jiàn)分光光度法

貨號(hào)：GOY-01S6322

分類：輔酶Ⅰ系列

商品介紹：

測(cè)定意義
輔酶ⅠNAD(H)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，NAD+是糖酵解（EMP）和三羧酸循環(huán)（TCA）的主要?dú)涫荏w，生成的NADH經(jīng)呼吸電子鏈（ETC）傳遞把電子交給氧，在合成ATP的同時(shí)，形成大量的ROS，同時(shí)NADH再生為NAD+。糖、脂、蛋白質(zhì)三大代謝物質(zhì)分解中的氧化反應(yīng)絕大部分通過(guò)這一體系完成。NAD(H)含量和NADH/NAD+比值的高低可用于評(píng)價(jià)糖酵解和TCA循環(huán)的強(qiáng)弱。較高的NAD(H)及NADH/NAD+比值說(shuō)明細(xì)胞呼吸耗氧量較高，處于過(guò)氧化狀態(tài)。此外，NADH/NAD+比值升高也可抑制糖酵解和TCA循環(huán)。另外，NAD+降解產(chǎn)物對(duì)細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)、代謝和基因表達(dá)等具有重要的調(diào)控作用。
測(cè)定原理
分別用酸性和堿性提取液提取樣品中NAD+和NADH，NADH通過(guò)PMS的遞氫作用，還原氧化型噻唑藍(lán)（MTT）為甲瓚，在570nm下檢測(cè)吸光值；而NAD+可被乙醇脫氫酶還原為NADH，進(jìn)一步采用MTT還原法檢測(cè)。
需自備的儀器和用品
可見(jiàn)分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、移液器、1 mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

試劑的組成和配制

提取液一：液體50mL×1瓶，4℃保存。

提取液二：液體50mL×1瓶，4℃保存。

試劑一：粉劑×1瓶，-20℃保存；臨用前加入40mL試劑四充分溶解待用，用不完的試劑4℃保存；

試劑二：液體18μL×1瓶，4℃保存；臨用前加入2.5mL蒸餾水充分溶解待用，用不完的試劑4℃保存；

試劑三：粉劑×1瓶，-20℃保存；臨用前加入2.5mL蒸餾水充分溶解待用，用不完的試劑4℃保存；

試劑四：液體50mL×1瓶， 4℃保存；

測(cè)定步驟

1、 分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至340nm，蒸餾水調(diào)零。

2、 將試劑一、二、三37℃(哺乳動(dòng)物)或25℃(其它物種)預(yù)熱10分鐘。

3、 加樣表：

樣本的前處理

①總FBP酶提取：建議稱取約0.1g樣本，加入1mL提取液一，冰浴勻漿后超聲破碎（冰浴，200W，破碎3s，間歇7s，總時(shí)間1min），然后4℃，8000g離心10min，取上清測(cè)定。

②胞漿和葉綠體FBP酶的分離：按照植物組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5～10的比例（建議稱取約0.1g樣本，加入1mL提取液一），冰浴勻漿后于4℃，200g離心5min，棄沉淀，取上清在4℃，8000g離心10min，取上清用于測(cè)定胞漿FBP酶活性，取沉淀加1mL提取液二，震蕩溶解后超聲破碎（冰浴，200W，破碎3s，間歇7s，總時(shí)間1min），然后4℃，8000g離心10min，取上清測(cè)定葉綠體中FBP酶活性。

建議測(cè)定總FBP酶活性，按照步驟①提取粗酶液，若需要分別測(cè)定胞漿和葉綠體中的FBP，則按照步驟②提取粗酶液。

干擾素誘導(dǎo)T-細(xì)胞α亞族趨化劑(ITαC)檢測(cè)試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)    CLIA Kit for Interferon Inducible T-Cell Alpha Chemoattractant (ITaC)    96T    Rattus norvegicus (Rat)    

趨化因子C-基元配體2(XCL2)檢測(cè)試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)    CLIA Kit for Chemokine C-Motif Ligand 2 (XCL2)    96T    Homo sapiens (Human)    

VEGF共調(diào)節(jié)趨化因子1(VCC1)檢測(cè)試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)    CLIA Kit for VEGF Co Regulated Chemokine 1 (VCC1)    96T    Homo sapiens (Human)    

VEGF共調(diào)節(jié)趨化因子1(VCC1)檢測(cè)試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)    CLIA Kit for VEGF Co Regulated Chemokine 1 (VCC1)    96T    Mus musculus (Mouse)    

VEGF共調(diào)節(jié)趨化因子1(VCC1)檢測(cè)試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)    CLIA Kit for VEGF Co Regulated Chemokine 1 (VCC1)    96T    Rattus norvegicus (Rat)    

白細(xì)胞介素24(IL24)檢測(cè)試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)    CLIA Kit for Interleukin 24 (IL24)    96T    Homo sapiens (Human)    

白細(xì)胞介素24(IL24)檢測(cè)試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)    CLIA Kit for Interleukin 24 (IL24)    96T    Mus musculus (Mouse)    

白細(xì)胞介素24(IL24)檢測(cè)試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)    CLIA Kit for Interleukin 24 (IL24)    96T    Rattus norvegicus (Rat)    

白介素20(IL20)檢測(cè)試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)    CLIA Kit for Interleukin 20 (IL20)    96T    Homo sapiens (Human)    

白介素29(IL29)檢測(cè)試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)    CLIA Kit for Interleukin 29 (IL29)    96T    Homo sapiens (Human)    

白介素22(IL22)檢測(cè)試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)    CLIA Kit for Interleukin 22 (IL22)    96T    Homo sapiens (Human)    

白介素22(IL22)檢測(cè)試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)    CLIA Kit for Interleukin 22 (IL22)    96T    Mus musculus (Mouse)    

生長(zhǎng)分化因子15(GDF15)檢測(cè)試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)    CLIA Kit for Growth Differentiation Factor 15 (GDF15)    96T    Homo sapiens (Human)    

生長(zhǎng)分化因子15(GDF15)檢測(cè)試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)    CLIA Kit for Growth Differentiation Factor 15 (GDF15)    96T    Mus musculus (Mouse)    

生長(zhǎng)分化因子15(GDF15)檢測(cè)試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)    CLIA Kit for Growth Differentiation Factor 15 (GDF15)    96T    Rattus norvegicus (Rat)    

ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白B10(ABCB10)檢測(cè)試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)    CLIA Kit for ATP Binding Cassette Transporter B10 (ABCB10)    96T    Homo sapiens (Human)    

WNK4(Ser/Thr-protein kinase WNK4; protein kinase with no lysine 4; protein kinase, lysine –dficient 4)  一種新的輔酶ⅠNAD(H)含量可見(jiàn)分光光度法測(cè)試盒絲氨酸/蘇氨酸激酶家族成員的基因WNK4（多肽抗原）     0.5mg    

ZNF300 (zinc finger protein ZNF300)- middle  鋅指蛋白300(抗原)     0.5ml    

ZNF268 (zinc finger protein ZNF268)- N-terminal (1a)  鋅指脂蛋白-1a(抗原)     0.5mg    

ZNF268 (zinc finger protein ZNF268)- middle (1b)  鋅指脂蛋白-1b(抗原）     0.5mg    

FBP活性計(jì)算：

（1）按樣本蛋白濃度計(jì)算

單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘生成1 nmol的NADPH定義為一個(gè)酶活力單位。

FBP（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=321.5×ΔA÷Cpr

（2）按樣本鮮重計(jì)算

單位的定義：每g組織每分鐘生成1 nmol的NADPH定義為一個(gè)酶活力單位。

FBP（nmol/min/g 鮮重）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(W ×V樣÷V樣總) ÷T=321.5×ΔA÷W

V反總：反應(yīng)體系總體積，1×10-3 L；ε：NADPH摩爾消光系數(shù)，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V樣：加入樣本體積，0.1 mL；V樣總：加入提取液體積，1mL；T：反應(yīng)時(shí)間，5 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g。