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看微生物細胞形態(tài)用什么顯微鏡?

時間:2014/11/6閱讀:12150
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看微生物形態(tài)用什么顯微鏡

觀察微生物細胞形態(tài)用什么顯微鏡

多少倍的顯微鏡可以看見微生物?

顯微鏡下看到的微生物有什么用?

在明視野顯微鏡下觀察微生物形態(tài)時,用染色標(biāo)本好還是未染色標(biāo)本好?

顯微鏡觀察微生物形態(tài)需要放大到多少倍?

微生物的解釋:

個體難以用肉眼觀察的一切微小生物之統(tǒng)稱。 微生物包括細菌、病毒、真菌、和少數(shù)藻類等。(但有些微生物是肉眼可以看見的,像屬于真菌的蘑菇、靈芝等。)病毒是一類由核酸和蛋白質(zhì)等少數(shù)幾種成分組成的“非細胞生物”,但是它的生存必須依賴于活細胞。根據(jù)存在的不同環(huán)境分為原核微生物、空間微生物、真菌微生物、酵母微生物、海洋微生物等。

微生物的作用和害處:

微生物對人類zui重要的影響之一是導(dǎo)致傳染病的流行。在人類疾病中有50%是由病毒引起。微生物導(dǎo)致人類疾病的歷史,也就是人類與之不斷斗爭的歷史。在疾病的預(yù)防和治療方面,人類取得了長足的進展,但是新現(xiàn)和再現(xiàn)的微生物感染還是不斷發(fā)生,像大量的病毒性疾病一直缺乏有效的治療藥物。一些疾病的致病機制并不清楚。大量的廣譜抗生素的濫用造成了強大的選擇壓力,使許多菌株發(fā)生變異,導(dǎo)致耐藥性的產(chǎn)生,人類健康受到新的威脅。一些分節(jié)段的病毒之間可以通過重組或重配發(fā)生變異,zui典型的例子就是流行性感冒病毒。

知道了微生物的具體定以后,實驗人員在對微生物進行研究時應(yīng)該采用什么類型的顯微鏡才能看到,用什么顯微鏡能看到更好,對常見的微生物形態(tài)進行觀察和分析。

顯微鏡的發(fā)明是為了能看到人肉眼所不能看到的微笑物品,微生物的體積非常小,那么必須借助顯微鏡對其進行放大觀察,加上微生物種類甚多,所以基本大部分的光學(xué)顯微鏡都能對微生物進行觀察,接下來的問題是,什么樣的微生物應(yīng)該用什么類型顯微鏡來進行觀察和分析,常見的可做微生物形態(tài)觀察的顯微鏡有生物顯微鏡,相差顯微鏡,倒置顯微鏡,熒光顯微鏡,共焦顯微鏡等等。

下面介紹各種不同的顯微鏡對微生物進行觀察:

  1.普通光學(xué)顯微鏡  采用自然光或燈光為光源,其波長約為0.4μm。顯微鏡的分辨率為波長的二分之一,即0.2μm,而肉眼可見的zui小形象為0.2mm。故用油(浸)鏡放大1000倍,能將0.2μm的微粒放大成肉眼可見的0.2mm。普通光學(xué)顯微鏡可用于細菌、放線菌和真菌等的觀察。

      2.暗視野顯微鏡常用于觀察不染色微生物形態(tài)和運動。在普通顯微鏡安裝暗視野聚光器后,光線不能從中間直接透入,視野呈暗色,當(dāng)標(biāo)本接受從聚光器邊緣斜射光后可發(fā)生散射,因此可在暗視野背景下觀察到光亮的微生物如細菌或螺旋體等。 

      3.相差顯微鏡相差顯微鏡利用相差板的光珊作用,改變直射光的光位相和振幅,將光相的差異轉(zhuǎn)換為光強度差。在相差顯微鏡下,當(dāng)光線透過不染色標(biāo)本時,由于標(biāo)本不同部位的密度不一致而引起光相的差異,可觀察到微生物形態(tài)、內(nèi)部結(jié)構(gòu)和運動方式等。

      4.熒光顯微鏡熒光顯微鏡與普通光學(xué)顯微鏡基本相同,主要區(qū)別在于光源、濾光片和聚光器。目前大多數(shù)使用的是落射光裝置,常用高壓汞燈作為光源,可發(fā)出紫外光或藍紫光。濾光片有激發(fā)濾光片和吸收濾光片二種。用藍光的熒光顯微鏡除可用一般明視野聚光器外,也可用暗視野聚光器,以加強熒光與背景的對比。本法適用于對熒光色素染色或與熒光抗體結(jié)合的細菌的檢測或鑒定。

      5.電子顯微鏡用電子流作為光源,波長與可見光相比差幾萬倍,大大提高了分辨力,并用磁性電圈作為光學(xué)放大系統(tǒng),放大倍數(shù)可達數(shù)萬倍或幾十萬倍,常用于病毒顆粒和細菌超微結(jié)構(gòu)的觀察。 

對未染色的微生物標(biāo)本進行觀察:

不染色標(biāo)本一般可用于觀察細菌形態(tài)、動力及運動情況。細菌未染色時無色透明,在顯微鏡下主要靠細菌的折光率與周圍環(huán)境的不同來進行觀察。有鞭毛的細菌運動活潑,無鞭毛的細菌則呈不規(guī)則布朗運動。梅毒蒼白密螺旋體、鉤端螺旋體、彎曲桿菌等的活菌各有特征鮮明的形態(tài)和運動方式,具有診斷意義。常用的方法有壓滴法、懸滴法和毛細管法等。
      1.懸滴法在潔凈凹玻片的凹孔四周涂上凡士林,用接種環(huán)取一環(huán)菌懸液放在蓋玻片中央,再將凹玻片的凹孔對準(zhǔn)蓋玻片中央的液滴并蓋上,然后迅速翻轉(zhuǎn),輕壓蓋玻片,使其與凹孔邊緣的凡士林粘緊封閉后置高倍鏡下(或暗視野)觀察。
      2.壓滴法用接種環(huán)取一環(huán)菌懸液置于潔凈玻片的中央,在菌懸液上輕輕蓋上一蓋玻片,注意避免產(chǎn)生氣泡并防止菌懸液外溢,靜止數(shù)秒鐘后置高倍鏡下明視野(或暗視野)觀察。
      3.毛細管法主要用于厭養(yǎng)菌動力的檢查。通常選用60~70mm長。0.5~1.0mm孔徑的毛細管虹吸厭養(yǎng)菌懸液后,用火焰將毛細管兩端熔封。并用塑膠紙將毛細管固定在載玻片上,置高倍鏡下暗視野觀察。 

用顯微鏡對染色微生物標(biāo)本進行觀察:

細菌標(biāo)本經(jīng)染色后,由于細菌與周圍環(huán)境間在顏色上形成鮮明對比,故在普通光學(xué)顯微鏡下可清楚地觀察到細菌的形態(tài)特征(如細菌的大小、形狀、排列等)和某些特殊結(jié)構(gòu)(如莢膜、鞭毛、芽孢等),并可根據(jù)染色反應(yīng)性對細菌加以分類鑒定。
  (一)細菌染色的一般程序細菌染色的一般程序是:涂片(干燥)固定染色。
      1.涂片制備血液、分泌物、排泄物、穿刺液和液體培養(yǎng)物,直接在載玻片上作薄膜涂片;尸檢或感染動物組織,病變局部涂抹采樣的棉拭子直接涂片。固體培養(yǎng)基上的菌落或菌苔的制片,先用接種環(huán)取一環(huán)生理鹽水置載玻片中央,再用無菌接種環(huán)取少量的培養(yǎng)物在生理鹽水中磨勻,涂布成1cm2大小的涂面,置室溫下自然干燥或遠火慢慢烘干。
      2.固定目的是殺死細菌,凝固細菌蛋白及結(jié)構(gòu),便于染色;促使細菌粘附在載玻片上,避免在水洗過程中被水沖掉;改變細菌對染料的通透性,有利于菌細胞內(nèi)結(jié)構(gòu)的染色。通常用火焰加熱固定,將已干燥的涂片在火焰中迅速通過3次,以手背皮膚接觸玻片不燙為佳。
      3.染色根據(jù)檢驗?zāi)康牟煌?,選擇不同的染色方法進行染色。染色時滴加染液,以復(fù)蓋度。
      4.媒染凡能增強染料和被染物的親和力,使染料固定于被染物及能引起細胞膜通透性改變的物質(zhì),稱媒染劑。常用的有明礬、鞣酸、金屬鹽和碘等,也有用加熱法促進著色。媒染劑可用于初染與復(fù)染之間,也可用于固定之后或含于固定液、染色中。
        5.脫色凡能使已著色的被染物脫去顏色的化學(xué)試劑稱為脫色劑。常用乙醇、丙酮等作為脫色劑。脫色劑可以查出細菌與染料結(jié)合的穩(wěn)定程度,作為鑒別染色之用。
      6.復(fù)染已脫色處理的細菌或其結(jié)構(gòu)常以復(fù)染液作復(fù)染以便于觀察。復(fù)染液與初染液的顏色不同而成一鮮明對比。復(fù)染不宜太強,以免掩蓋初染的顏色。

通過本文,可以知道對微生物進行觀察可以用到生物顯微鏡,暗場顯微鏡,相差顯微鏡,熒光顯微鏡,電子顯微鏡等儀器,用戶如果對顯微鏡選購過程中有任何疑問,瑞科中儀咨詢。

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