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目錄:北京索萊寶科技有限公司>>生化指標(biāo)檢測(cè)試劑盒>>氧化型谷胱甘肽(GSSG)含量檢測(cè)試劑盒>> 50管/48樣氧化型谷胱甘肽(GSSG)含量檢測(cè)試劑盒

氧化型谷胱甘肽(GSSG)含量檢測(cè)試劑盒
  • 氧化型谷胱甘肽(GSSG)含量檢測(cè)試劑盒
參考價(jià) 面議
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)
參考價(jià) 面議
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)
  • 品牌 SOLARBIO/索萊寶
  • 型號(hào) 50管/48樣
  • 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)商
  • 所在地 北京市
屬性

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更新時(shí)間:2024-08-22 19:05:04瀏覽次數(shù):2410評(píng)價(jià)

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供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 50管/48樣
貨號(hào) BC1180
氧化型谷胱甘肽(GSSG)含量檢測(cè)試劑盒
氧化型谷胱甘肽(GSSG)是谷胱甘肽(GSH)的氧化形式,又稱為二硫代谷胱甘肽,是兩分子的谷胱甘肽氧化而成。GSSG會(huì)被谷胱甘肽還原酶還原成GSH,因此機(jī)體中大多數(shù)是以還原型形式存在。

氧化型谷胱甘肽(GSSG)含量檢測(cè)試劑盒?說(shuō)明書

  可見(jiàn)分光光度法 BC1180 :50T/48S 試劑一:液體1瓶,50ml,4℃保存。 試劑二:液體1支,170μl,4℃保存。 試劑三:液體1瓶 60ml,4℃保存。
試劑四:液體1瓶 8ml,4℃保存。 試劑五:粉劑1支,4℃保存,用前8ml蒸餾水溶解。 試劑六:液體1支,40μl,用前0.8ml蒸餾水稀釋。 標(biāo)準(zhǔn)品:粉劑1支,10mg,4℃避光保存。 氧化型谷胱甘肽(GSSG)是谷胱甘肽(GSH)的氧化形式,又稱為二硫代谷胱甘肽,是兩分子的谷胱甘肽氧化而成。GSSG會(huì)被谷胱甘肽還原酶還原成GSH,因此機(jī)體中大多數(shù)是以還原型形式存在。測(cè)定細(xì)胞內(nèi)GSH和GSSG含量以及GSH/GSSG比值,能夠很好地反映細(xì)胞所處的氧化還原狀態(tài)。本試劑盒利用谷胱甘肽能和5,5’-二硫代-雙-(2-硝基苯甲酸)(5,5’-dithiobis-2-nitrobenoic acid,DTNB)反應(yīng)產(chǎn)生2-硝基-5-巰基苯甲酸,2-硝基-5-巰基苯甲酸在波長(zhǎng)412nm處具有光吸收的特點(diǎn),通過(guò)2-乙烯吡啶抑制樣品中原有的還原型谷胱甘肽,然后利用谷胱甘肽還原酶將GSSG還原為GSH,借此測(cè)定氧化型谷胱甘肽的含量。 分析天平、微量勻漿器(規(guī)格2ml)、低溫離心機(jī)、水浴鍋、移液器、可見(jiàn)分光光度計(jì)、1ml比色皿。
一、 樣品的處理
(1)組織處理 新鮮組織先用PBS沖洗2次,然后稱取動(dòng)物組織或者植物組織0.1g。加入用試劑一潤(rùn)洗過(guò)的勻漿器中(勻漿器提前放冰上預(yù)冷);然后加入1ml試劑一(組織/試劑一比例保持不變即可),迅速冰上充分研磨(使用液氮研磨效果更好);10000rpm 4℃離心10min;取上清液放置于4℃待測(cè),若暫時(shí)不能完成測(cè)試可放于-80℃保存(可保存10天)。 (2)血液處理 血漿:將收集的抗凝血于4℃,600g離心10分鐘,吸取上層血漿到另一支試管中,加入等體積的試劑一,4℃,8000g離心10分鐘,將上清移入新的試管中放置于4℃待測(cè),若暫時(shí)不能完成測(cè)試可放于-80℃保存(可保存10天)。
血細(xì)胞:將收集的抗凝血于4℃,600g離心10分鐘,棄去上層血漿用3倍體積的PBS清洗3次(用PBS重懸血細(xì)胞,600g離心10分鐘),加入等體積試劑一,混勻后4℃放置10分鐘,8000g離心10分鐘,吸取上清放于4℃待測(cè),若暫時(shí)不能完成測(cè)試可放于-80℃保存(可保存10天)。 (3)細(xì)胞處理 收集不少于108個(gè)細(xì)胞,先用PBS清洗細(xì)胞2次(PBS重懸細(xì)胞,600g離心10分鐘),加入3倍細(xì)胞沉淀體積的試劑一重懸細(xì)胞,反復(fù)凍融2-3次(可在液氮中凍結(jié),37℃水浴中溶解),8000g離心10分鐘,收集上清于4℃待測(cè),若暫時(shí)不能完成測(cè)試可放于-80℃保存(可保存10天)。

二、氧化型谷胱甘肽(GSSG)含量檢測(cè)試劑盒實(shí)驗(yàn)操作
1、分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)412nm,蒸餾水調(diào)零。
2、試劑二放置37℃(哺乳動(dòng)物)或25℃(一般物種)水浴中保溫30min。
3、標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:將標(biāo)準(zhǔn)品用1ml蒸餾水溶解(4℃保存),濃度為10mg/ml。取適當(dāng)溶液配制濃度為25μg/ml、20μg/ml、12.5μg/ml、6.25μg/ml、3.125μg/ml、0μg/ml的標(biāo)準(zhǔn)品(試劑一十倍稀釋后進(jìn)行稀釋)。
4、取1.5ml離心管,加入100μL稀釋好的標(biāo)準(zhǔn)品或樣品,加入2μL試劑二,混勻后37℃孵育30分鐘。
5、制作標(biāo)準(zhǔn)曲線
孵育完成后標(biāo)準(zhǔn)管依次加入700μL試劑三,100 μL試劑四,100 μL試劑五,10 μL試劑六,迅速混勻后,測(cè)定412nm處30 s和150 s光吸收A1和A2。吸光度(A2-A1)為橫坐標(biāo)(x),濃度為縱坐標(biāo)(y)做標(biāo)準(zhǔn)曲線。
6、樣品管依次加入700μL試劑三,100 μL試劑四,100 μL試劑五,10 μL試劑六,迅速混勻后,測(cè)定412nm處30 s和150 s光吸收A1和A2,△A= A2- A1。
三、氧化型谷胱甘肽(GSSG)含量檢測(cè)試劑盒GSSG含量計(jì)算 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線,將樣品△A帶入公式中(x),計(jì)算出樣品濃度y(μg/ml)。 (1)按蛋白濃度計(jì)算 GSSG(μg / mg prot)=y×V 反總÷V 樣÷Cpr =y×10.12÷Cpr (2)按樣本質(zhì)量計(jì)算 GSSG(μg /g)= y×V 反總÷(V 樣÷V 樣總×W)= y×10.12 ÷W (3)按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算 GSSG(μg /104 cell)= y×V 反總÷(V 樣÷V 樣總×細(xì)胞數(shù)量)= y×10.12 ÷細(xì)胞數(shù)量 (4)按液體體積計(jì)算 GSSG(μg / mL)= y×V 反總÷V 樣= y×10 V 反總:反應(yīng)總體積,1.012mL;V 樣總:上清液總體積,1 mL;V 樣:加入反應(yīng)體系中上清液體積,100μL=0.1 mL;W:樣品質(zhì)量,g ;Cpr:上清液蛋白質(zhì)濃度,mg/mL。
1、樣品處理需勻漿*,若當(dāng)天不能完成測(cè)量,可放-80℃保存。
2、若不確定樣品中GSSG含量的高低,可稀釋幾個(gè)梯度后再進(jìn)行測(cè)量。
3、此方法利用酶促反應(yīng)速率計(jì)算底物濃度,盡量準(zhǔn)確在30秒和150秒處完成讀數(shù)。
4、因?yàn)樵噭┮恢泻械鞍踪|(zhì)沉淀劑,因此上清液不能用于蛋白濃度測(cè)定。

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