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目錄:北京索萊寶科技有限公司>>基因工程>>基因組和質(zhì)粒提取試劑盒>> D6943Omega-質(zhì)粒提取試劑盒

Omega-質(zhì)粒提取試劑盒
  • Omega-質(zhì)粒提取試劑盒
參考價 面議
具體成交價以合同協(xié)議為準(zhǔn)
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  • 品牌
  • 型號 D6943
  • 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)商
  • 所在地 北京市
屬性

供貨周期:現(xiàn)貨

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更新時間:2024-08-20 07:04:59瀏覽次數(shù):6338評價

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Omega-質(zhì)粒提取試劑盒
產(chǎn)品簡介:
試劑盒采用酶法破碎酵母細(xì)胞壁和堿裂解法裂解酵母細(xì)胞來提取酵母質(zhì)粒 DNA。所采用的酵母破壁酶能有效地破壞酵母細(xì)胞壁,提高酵母質(zhì)粒 DNA 的產(chǎn)量。吸附柱中采用的硅基質(zhì)材料能高效、專一地附 DNA,可限度去除雜質(zhì)蛋白質(zhì)及細(xì)胞中其他有機化合物。使用本試劑盒提取的酵母質(zhì)粒DNA可適用于各種常規(guī)的分子生物學(xué)實驗,包括酶切、PCR、測序、連接和轉(zhuǎn)化等試驗

Omega-質(zhì)粒提取試劑盒

操作步驟: 

使用前請先在漂洗液中加入無水乙醇,加入體積請參照瓶上的標(biāo)簽。溶液YP1在使用前先加入RNaseA(將試劑盒中提供的 RNaseA全部加入),混勻,置于 2-8℃保存。如非指明,所有離心步驟均為使用臺式

離心機在室溫下離心。 

1、取1-5ml酵母培養(yǎng)物(不超過 5×107cells),12000rpm離心 1min,盡量吸除上清(菌液較多時可以通過多次離心將菌體沉淀收集到一個離心管中)。 

2、酵母細(xì)胞壁的破除: 

A、酶法:向酵母菌體中加入 470ul 山梨醇 Buffer,充分懸浮菌體,加入 25ul 酵母破壁酶和 5ul β-巰基乙醇,充分混勻,30℃處理 1-2h,期間可顛倒離心管混勻數(shù)次。12000rpm 離心 1min,棄上清,收集沉淀。向沉淀中加入 250ul 溶液 YP1(請先檢查是否已加入 RNaseA) ,充分懸浮沉淀。注意:如果菌塊未*混勻,會影響裂解導(dǎo)致質(zhì)粒提取量和純度偏低。 

B、玻璃珠法:向酵母菌體中加入 250ul 溶液 YP1(請先檢查是否已加入 RNaseA) ,充分懸浮沉淀。加入 150-200ul酸洗玻璃珠(自備),漩渦振蕩 10min。簡短離心使玻璃珠沉降到離心管底,吸取上清(如上清有所損失,請用溶液 YP1 補足 250ul)于另一干凈離心管中。 

3、向離心管中加入 250ul溶液 YP2,溫和地上下翻轉(zhuǎn) 6-8 次使菌體充分裂解。注意:混勻一定要溫和,以

免污染細(xì)菌基因組 DNA,此時菌液應(yīng)變得清亮粘稠,作用時間不要超過 5 min,以免質(zhì)粒受到破壞。 

4、向離心管中加入 350ul溶液 YP3,立即溫和地上下翻轉(zhuǎn) 6-8次,充分混勻,此時會出現(xiàn)白色絮狀沉淀。12000rpm離心 10 min,用移液器小心地將上清轉(zhuǎn)移到另一個干凈的離心管中,盡量不要吸出沉淀。注意:溶液 YP3 加入后應(yīng)立即混合,避免產(chǎn)生局部沉淀。如果上清中還有微小白色沉淀,可再次離心后取上清。 

5、將上一步所得上清液加入吸附柱中,室溫放置 2min,12000rpm 離心 1min,倒掉收集管中的廢液,吸附柱重新放回收集管中。 

6、向吸附柱中加入 700ul 漂洗液(使用前請先檢查是否已加入無水乙醇),12000rpm 離心 1min,棄廢液,將吸附柱放入收集管中。 

7、向吸附柱中加入 500ul漂洗液,12000rpm離心 1min,棄廢液,將吸附柱放入收集管中。 

8、12000rpm 離心 2min,將吸附柱敞口置于室溫或 50℃溫箱放置數(shù)分鐘,目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除,否則漂洗液中的乙醇會影響后續(xù)的實驗如酶切、PCR 等。 

9、將吸附柱放入一個干凈的離心管中,向吸附膜中央懸空滴加 50-200ul 經(jīng) 65℃水浴預(yù)熱的洗脫液,室溫放置 2min,12000rpm離心 1min。 

10、為了增加質(zhì)粒的回收效率,可將得到的洗脫液重新加入吸附柱中,室溫放置 2min, 12000rpm離心 1min。  

注意事項: 

1、使用前請先檢查溶液 YP2 和溶液 YP3 是否出現(xiàn)混濁,如有混濁現(xiàn)象,可在 37℃水浴中加熱幾分鐘,待溶液恢復(fù)澄清后再使用。 

2、洗脫緩沖液體積不應(yīng)少于 50ul,體積過小影響回收效率;洗脫液的 pH值對洗脫效率也有影響,若需要用水做洗脫液應(yīng)保證其 pH 值在 8.0 左右(可用 NaOH 將水的 pH 值調(diào)此范圍),pH 值低于 7.0 會降低。洗脫效率;DNA產(chǎn)物應(yīng)保存在-20℃,以防 DNA降解。 

3、質(zhì)粒得率與酵母菌株、質(zhì)??截悢?shù)、培養(yǎng)條件等因素有關(guān)。通常酵母質(zhì)??截悢?shù)都很低,一般通過電泳或分光光度計法都很難檢測到,可通過 PCR或轉(zhuǎn)化大腸桿菌來檢測。 

4、DNA濃度及純度檢測:得到的基因組DN**段的大小與樣品保存時間、操作過程中的剪切力等因素有關(guān)?;厥盏玫降腄N**段可用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計檢測濃度與純度。DNA應(yīng)在OD260處有顯著吸收峰, OD260值為 1 相當(dāng)于大約 50  μg/ml雙鏈DNA、40  μg/ml單鏈DNA。OD260/OD280比值應(yīng)為1.7-1.9,如果洗脫時不使用洗脫緩沖液,而使用去離子水,比值會偏低,因為pH值和離子存在會影響光吸收值,但并不表示純度低。 

Omega-質(zhì)粒提取試劑盒

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