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雞傳染性支氣管炎病毒熒光RT-PCR檢測試劑盒說明書

【用途】用于雞傳染性支氣管炎病毒核酸的檢測。

【規(guī)格】50T/盒

【試劑】

【操作步驟】

1.雞傳染性支氣管炎病毒熒光RT-PCR檢測試劑盒核酸提取  

(1) 取疑似病料（氣管及分泌物、腎臟、肺臟等病毒靶組織），用PBS研磨成1：3懸液，在-20℃凍融1次，經(jīng)12000 r/min離心3 min，上清液-20 ℃保存?zhèn)溆谩?/span>

（2）取200uL上清液，移入1.5mL滅菌EP管中，加入200uLSR-I，漩渦振蕩混合均勻，靜置5min。

（3）加75uL TU-1，漩渦振蕩混合均勻，12000r/min離心5 min。

（4）將上清轉(zhuǎn)移到新的2 ml離心管（試劑盒內(nèi)提供）中，加入300 uL SR-Ⅳ，上下倒置6-8次，混合均勻。

（5）將步驟4中的混合液移入制備管中（試劑盒內(nèi)提供），并將制備管置于同一2 ml離心管，8000 r/min離心1min。

（6）棄濾液，將制備管置回到2 ml離心管中，加500 uL SR-II，室溫靜置1min，12000 r/min離心1 min。

（7）棄濾液，將制備管置回到2 ml離心管中，加700 uL SR-Ⅲ，12000 r/min離心1 min。

（8）將制備管置回到2 ml離心管中，12000 r/min離心2min。

（9） 將制備管置于潔凈的1.5 ml離心管中（試劑盒內(nèi)提供），在制備管膜中央加40 uL TU-2， 室溫靜置1 min。12000 r/min離心1 min洗脫。洗脫液即為模板，即用或-20℃凍存?zhèn)溆谩?/span>

2.One-Step RT- PCR加樣體系(20uL體系)

3.反應(yīng)程序

4.電泳

配制1.0%瓊脂糖凝膠，取PCR產(chǎn)物5uL，混合1uL6xDNA Loading buffer，加樣于凝膠孔中，同時在相鄰孔加5uL DL2000 DNA Marker，在120-150v 電壓下，1×TAE液中電泳15-20min，在紫外成像儀下觀察結(jié)果。

【結(jié)果判定】

在約490bp左右位置出現(xiàn)擴增帶，表明雞傳染性支氣管炎病毒核酸檢測陽性；

若在490bp處沒有條帶出現(xiàn)則樣品判為陰性。

1.標(biāo)準(zhǔn)陽性片段M.DL2000 Marker

【注意事項】

1. 陽性對照極易污染試驗環(huán)境，如果做陽性對照,吸取陽性對照槍頭妥善處理

2. -20℃保存的試劑在使用前應(yīng)*融化，振蕩混勻后 8000rpm 離心 15 秒使液體全部沉于管底，置冰盒中取用。嚴禁使用超過有效期限的試劑；嚴禁混用不同試劑盒組分。

3. PCR 實驗室應(yīng)按功能分為配液區(qū)、樣品處理區(qū)、擴增區(qū)、電泳區(qū)。物流方向依次為配液區(qū) →樣品處理區(qū)→擴增區(qū)→電泳區(qū)。所有接觸病料的物品、器具，尤其是陽性對照及PCR 產(chǎn)物和使用后的電泳緩沖液均應(yīng)合理處置，以免污染實驗室。

4. 嚴格按照國標(biāo)和說明書要求操作。吸取液體時移液器吸頭盡量在液體上層吸取，移液精確；吸取不同液體時必須更換移液器滴頭，防止試劑組分污染以及樣品污染。

5.試劑盒組分在生產(chǎn)分裝時考慮到液體的損耗，實際裝量略多于標(biāo)注裝量，因此嚴禁直接在 原包裝中配制反應(yīng)體系，以免造成反應(yīng)體系各組分比例不準(zhǔn)確。

【保存期】本制品有效期為1年。

僅供獸醫(yī)診斷使用

長期提供原核、真核蛋白表達構(gòu)建服務(wù)

長期 提供抗原偶聯(lián)、 HRP、生物素、糖基化、親和素、FITC等偶聯(lián)標(biāo)記多肽、抗體、抗原、蛋白等服務(wù)