什么叫鬼峰？在做液相色譜反相系統(tǒng)梯度洗脫時，有時會遇到儀器不進(jìn)樣也有出峰的情況，這種峰影響定量結(jié)果，也可使分析工作無法進(jìn)行，由于它神出鬼沒的特質(zhì)，所以被稱為鬼峰。那我們就來了解下，鬼峰出現(xiàn)的可能原因及排除方法。

在懷疑峰型異常是不是鬼峰時，我們首先可以通過仔細(xì)核查操作條件是否與分析方法一致，儀器工作狀態(tài)是否正常來看有無操作失誤，確定不是上述失誤后，儀器不進(jìn)樣，或者進(jìn)流動相，或者只運(yùn)行方法看基線中是否還存在莫名的色譜峰來判斷是否為鬼峰。從鬼峰出現(xiàn)的頻率來看，一般來說，可以從兩個大方面進(jìn)行考慮：流動相和液相系統(tǒng)。

鬼峰產(chǎn)生的原因是多種多樣的，根據(jù)本人的經(jīng)驗(yàn)以及文獻(xiàn)報道，將原因歸納為以下幾個方面：

1、流動相、樣品稀釋液、儀器或是容器中存在雜質(zhì)，當(dāng)梯度開始時由于有機(jī)相比例不高，洗脫能力不強(qiáng)，雜質(zhì)在色譜柱柱頭富集，隨著流動相比例變化，洗脫能力增強(qiáng)，富集的雜質(zhì)被洗脫，從而形成鬼峰。

2、流動相脫氣不理想?？諝庠谟袡C(jī)相和水中的溶解度不同，當(dāng)水和有機(jī)相混合時，氣泡就產(chǎn)生了。

3、操作問題。

試劑問題

1、有機(jī)溶劑

甲醇制備工藝相對乙腈來說較為簡單，雜質(zhì)含量也較少。但是由于甲醇紫外吸收范圍比乙腈廣，所以當(dāng)使用紫外檢測器時，尤其是波長較低時，盡量使用乙腈作為有機(jī)相，用甲醇的話漂移太大。而用作梯度色譜的乙腈質(zhì)量要求較高，一般用進(jìn)口梯度色譜專用乙腈能夠很好的減少鬼峰的出現(xiàn)。

2、水

很多單位用自制蒸餾水作為水相，但是結(jié)果并不是很好。原因就是一些低沸點(diǎn)的有機(jī)雜質(zhì)并不能夠通過蒸餾除掉。有條件的盡量用HPLC級的純水，沒有條件的也可用娃哈哈或是屈臣氏等水代替，但是如果色譜條件比較嚴(yán)格也是有可能出問題的。

3、其它試劑

緩沖鹽、TFA、EDTA等試劑也會對流動相造成很大的影響，盡量用純度高的試劑配制流動相。

4、流動相配置好后預(yù)先超聲脫氣。

5、盛放流動相的容器或是量具受到污染。

這種污染可能來自于洗滌劑、鉻酸洗液或是其他實(shí)驗(yàn)人員用完后的殘留雜質(zhì)。流動相容器的清洗一般用干凈的水+有機(jī)溶劑涮洗就行，過多的清洗步驟反而可能造成二次污染。有時流動相容器的塑料蓋碎片都有可能是雜質(zhì)的來源。

6、pH計(jì)

很多pH計(jì)以聚碳酸酯作為外殼，然而聚碳酸酯是可以溶于有機(jī)溶劑的，所以盡量使用玻璃pH計(jì)來測量流動相的pH。

7、濾膜

劣質(zhì)的或者型號錯誤的濾膜往往是鬼峰出現(xiàn)的原因。

8、放置時間過長。

流動相在空氣中暴露時間過長，就可能吸收空氣中的有機(jī)雜質(zhì)，有時流動相中的添加劑，例如TFA，時間長了會氧化從而產(chǎn)生雜質(zhì)。

儀器問題

1、液相的流動相管路被污染。

長時間的使用含水量較高的流動相(尤其是加入緩沖鹽的)，細(xì)菌就容易在管路中滋生，細(xì)菌的代謝產(chǎn)物或是細(xì)胞碎片能造成鬼峰。

2、輸送泵故障，造成系統(tǒng)壓力不穩(wěn)，從而產(chǎn)生鬼峰。

3、單向閥堵塞。

造成系統(tǒng)壓力不穩(wěn)，從而產(chǎn)生鬼峰。早期島津的液相單向閥貌似不能用純乙腈作為流動相，現(xiàn)在應(yīng)該已經(jīng)得到改進(jìn)。

4、在線脫氣機(jī)脫氣不理想。

5、兩種流動相的有機(jī)相比例相差太大。

例如A為100%水，B為100%乙腈。在梯度條件允許的情況下盡量減少兩中流動相之間的差距，降低空氣在兩中流動相中溶解度的差異，從而減少氣泡的產(chǎn)生。

6、溶劑瓶和溶劑過濾頭的污染。

長時間的使用純水相或含水量較高的流動相（尤其是加入緩沖鹽的），細(xì)菌容易滋生，細(xì)菌的代謝產(chǎn)物或是細(xì)胞碎片停留導(dǎo)致污染。如果流動相在使用完后長期未更換新的流動相瓶或者流動相瓶未做清洗，而是采用直接添加補(bǔ)充的方式也可能會導(dǎo)致鬼峰的產(chǎn)生。

此種情況建議制定好流動相瓶清洗和更換計(jì)劃，進(jìn)行更換或清洗。

此外，溶劑過濾頭也可存在污染。去除溶劑瓶內(nèi)的過濾頭看鬼峰能否變小或消失，如果變小或消失則可以更換溶劑瓶內(nèi)的過濾頭。

7、來自樣品殘留。

樣品可在儀器各個板塊殘留。我們可逐一進(jìn)行排查。

a.確認(rèn)問題來自進(jìn)樣器樣品殘留。

將進(jìn)樣器的入口和出口管線用兩通直接連接，如果鬼峰問題解決則懷疑進(jìn)樣針，針座、六通閥轉(zhuǎn)子污染問題，然后進(jìn)行相關(guān)的清洗和更換。

Tips：在懷疑進(jìn)樣器殘留問題前要先檢查連接管線是否正常，不然也會導(dǎo)致鬼峰。

b.確認(rèn)問題來自色譜柱的樣品殘留。

色譜柱可對流動相或系統(tǒng)流路內(nèi)的強(qiáng)保留污染組分起到富集作用，在有機(jī)相比例隨梯度程序變化的過程中而被沖洗出來。

將色譜柱更換成兩通，如果鬼峰消除則是色譜柱被污染?？赏ㄟ^清洗色譜柱或者直接更換新的色譜柱解決。