如何知道應(yīng)該選用什么色譜柱是實驗中很重要的部分，一些實驗分析只能選定一種特定的色譜柱，有的分析方法雖然可以選用相同的色譜柱也可以工作，但對實驗結(jié)果可能會存在一定的問題。所以選擇的色譜柱是否正確，是否經(jīng)過色譜儀方法調(diào)試后可以直接使用，色譜柱的選擇對分析方法是否成功是非常重要的問題！本次小編帶大家一起學(xué)習(xí)色譜柱的選擇。
一、色譜柱選擇一般方法
色譜柱選擇一般有藥典方法、國標(biāo)或者行業(yè)監(jiān)測標(biāo)準(zhǔn)的，先可以按照方法來選產(chǎn)品，也可以向供應(yīng)商請求技術(shù)支持；如果沒有固定的方法需要自己開發(fā)，可以查一些文獻(xiàn)，看看之別人做的時候用的什么柱子，再做個對比選擇，如果實在沒有參考的話，就需要按照色譜柱選擇原則來選。
選擇一個固定相，根據(jù)分析對象的選擇性、性和固定相分子中苯基含量進(jìn)行仔細(xì)判定；
要了解色譜柱直徑如何影響柱效、溶質(zhì)保留值、柱頭壓和載氣流速等因素；
確定多長的柱長會影響溶質(zhì)的保留值、柱頭壓及成本；
從柱容量、惰性、流失和溫度上限出發(fā)，正確評估薄、厚液膜色譜柱的不同。
選擇色譜柱，先需要確定要使用的是填充柱還是毛細(xì)管柱。填充柱比毛細(xì)管柱具有更高的樣品容量，雖然這一差距由于發(fā)明了大孔 530mm 毛細(xì)管而大大縮小。檢測器靈敏度的改進(jìn)也減少了對大劑量樣品的需要。填充柱可能具有優(yōu)勢的域是氣體樣品的分析。現(xiàn)代液相色譜中，分離效果好壞很大程度上取決于色譜填料的選擇。1、色譜柱材料：這種材料必須盡可能是惰性的，尤其是對于痕量分析或容易拖尾的化合物，例如硫醇或類似的活性化合物。對于毛細(xì)管柱，熔融石英是可選的材料。有兩種類型的熔融石英毛細(xì)管柱：壁涂開管柱 (WCOT) 色譜柱和多孔層開管柱 (PLOT) 色譜柱。WCOT 色譜柱是固定相液膜涂漬在去活的色譜柱壁上。這是氣相色譜中較常用的色譜柱。PLOT 色譜柱中固定相是固體物質(zhì)涂漬到色譜柱壁上。2.固定相：選擇毛細(xì)管柱時，先需要確定是否需要 PLOT 色譜柱。下面是 3 種 PLOT 色譜柱的典型應(yīng)用域：分子篩不揮發(fā)氣體，對水比較敏感二乙烯基苯 (DVB) — HP-PLOT Q C1 到 C3 全部異構(gòu)體的分離，部分 C4 和更高的（直到 C14）的異構(gòu)體分離，性化合物，揮發(fā)性溶劑可以允許含水氧化鋁 Al2O3 C1 到 C10 異構(gòu)體的分離, 對水比較敏感。正相色譜：正相色譜用的固定相通常為硅膠（Silica），以及其他具有性官能團(tuán)，如胺基團(tuán)(NH2,APS)和氰基團(tuán)（CN，CPS）的鍵合相填料。由于硅膠表面的硅羥基（SiOH）或其他團(tuán)的性較強，因此，分離的次序是依據(jù)樣品中的各組份的性大小，即性強弱的組份先被沖洗出。反相色譜：反相色譜填料常是以硅膠為基礎(chǔ)，表面鍵合有性相對較弱的官能團(tuán)的鍵合相。反相色譜所使用的流動相性較強，通常為水，緩沖液與甲醇，已腈等混合物。樣品檢測出的順序是性較強組合先被沖出，而性弱的組份會在色譜柱上有更強的保留。常用的反相填料有C18（ODS）、C8（MOS）、C4（B）、C6H5（Phenyl）等。聚合物填料：聚合物調(diào)料多為聚苯乙烯-二乙烯基苯或聚甲基丙酸酯等，其主要優(yōu)點是在PH值為1～14均可使用。相對與硅膠基質(zhì)的C18填料，這類填料具有更強的疏水性；大孔的聚合物填料對蛋白質(zhì)等樣品的分離有幫助?，F(xiàn)在的聚合物填料的缺點是相對硅膠基質(zhì)填料，色譜柱柱效較低。其他無機填料：其它HPLC的無機填料色譜柱也已經(jīng)商品化。由于其特殊的性質(zhì)，一般于特殊的用途。如石墨化碳也用于正逐漸成為反相色譜填料。這種填料的分離不同與硅膠基質(zhì)烷基鍵合相，石墨化碳的表面即是保留的基礎(chǔ)，不再需其它的表面改性，該柱填料一般比烷基鍵合硅膠或多孔聚合物填料的保留能力更強，石墨化碳可用于分離某些幾何導(dǎo)構(gòu)體，又由于HPLC流動相中不會被溶解，這類柱可在任何PH與溫度下使用。氧化鋁也可用于HPLC，氧化鋁微粒剛性強，可制成穩(wěn)定的色譜柱柱床，其優(yōu)點是可在PH高達(dá)12的流動相中使用。但由于氧化鋁與堿性化合物作用也很強，應(yīng)用范圍受到一定的限制，所以未能廣泛應(yīng)用，新型氧化鋯填料也可用于HPLC，商品化的僅有聚合物涂層的多孔氧化鋯微球色譜柱，應(yīng)用PH范圍1～14，溫度可達(dá)100℃。由于氧化鋯填料幾年才開始研究，加之面臨的實驗難度，其重要用途與優(yōu)勢尚在進(jìn)行中。
