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上海研謹(jǐn)生物科技有限公司

石蠟/冰凍切片TUNEL凋亡

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更新時(shí)間:2025-01-14 12:31:19瀏覽次數(shù):4484次

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應(yīng)用領(lǐng)域 醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè)
服務(wù)名稱: 石蠟/冰凍切片TUNEL凋亡
提供商: 上海研研謹(jǐn)生物
規(guī)格: 石蠟/冰凍切片TUNEL凋亡
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TUNEL凋亡顯色法

TUNEL (TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling)法檢測(cè)細(xì)胞凋亡的原理是當(dāng)細(xì)胞發(fā)生凋亡時(shí),DNA內(nèi)切酶被激活,核小體間的基因組DNA被切斷,暴露的3'-OH可以在末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT)

加上帶有生物素(Biotin) 標(biāo)記的dUTP即Bitin-dUTP.,隨后于辣根過氧化物酶 (HRP) 標(biāo)記的streptavidin結(jié)合, 在HRP的催化下通過DAB顯色來顯示凋亡細(xì)胞,從而可以通過普通光學(xué)顯微鏡檢測(cè)到細(xì)胞凋亡。

 

實(shí)驗(yàn)意義

1. TUNEL法是一種分子生物學(xué) 與形態(tài)學(xué)相結(jié)合的研究方法,可對(duì)完整的單個(gè)凋亡細(xì)胞或者凋亡小體進(jìn)行原位染色,可以準(zhǔn)確反映細(xì)胞凋亡典型的生物化學(xué)和形態(tài)特征。

2.可用于石蠟切片冰凍切片培養(yǎng)的細(xì)胞等進(jìn)行細(xì)胞凋亡檢測(cè),靈敏度遠(yuǎn)比一般的組織化學(xué)和生物化學(xué)方法要高。

3.操作簡(jiǎn)便快捷,在細(xì)胞凋亡的研究中被廣泛采用。

 

實(shí)驗(yàn)步驟

 

1.石蠟切片TUNEL顯色法:

①石蠟切片常規(guī)脫蠟至水,脫蠟劑二甲苯,至水劑乙醇;

②PBS漂洗3*5 min; .

③加入蛋白酶K工作液37°C反應(yīng)15-30 min, PBS漂洗3x5 min;

④4%多聚甲醛(pH7 .4的PBS)室溫固定15-30 min, PBS漂洗3x5 min;

⑤浸入封閉液(3%H202)室溫封閉10 min, PBS漂洗3x5 min;

⑥加入適量TdT酶反應(yīng)液,暗濕盒中37°C反應(yīng)1 h,用SSC室溫15 min終止反應(yīng)后,PBS漂洗3x5 min; .

⑦浸入0.3% H202封閉內(nèi)源性過氧化物酶活性,室溫孵育3-5 min, PBS漂洗3x5 min;

⑧滴加Streptavidin-HRP工作液,37*C反應(yīng)30-60 min, PBS漂洗3x5 min;

⑨滴加DAB顯色液后用去離子水漂洗數(shù)次;

10.選擇是否用DAPI復(fù)染細(xì)胞核;

脫水、透明、中性樹膠封片后進(jìn)行觀察。

 

2.冰凍切片TUNEL顯色法:

①新鮮組織經(jīng)處理后,立即在恒冷冰凍切片機(jī)內(nèi)切片,厚度為5~6 um;

②防脫玻片,貼片,室溫陰干約12 h;

③4%多聚甲醛(pH7 4的PBS)室溫固定10 min, PBS漂洗3x5 min;

④浸入封閉液(3%H202)室溫封閉10 min, PBS漂洗3x5 min;

⑤浸入邇透液(0.1% Triton X-100溶于PBS中),室溫通透30 S-2 min;

⑥加入適量TdT酶反應(yīng)液,暗濕盒中37°C反應(yīng)1 h,用SSC室溫15 min終止反應(yīng)后,PBS漂洗3x5 min; .

⑦浸入0.3% H2O2封閉內(nèi)源性過氧化物酶活性,室溫孵育3-5 min, PBS漂洗3x5 min;

⑧滴加Streptavidin-HRP工作液,379C反應(yīng)30-60 min, PBS漂洗3x5 min;

⑨滴加DAB顯色液后用去離子水漂洗數(shù)次:

@選擇是否用DAPI復(fù)染細(xì)胞核;

脫水、透明、中性樹膠封片后進(jìn)行觀察。

 

 

實(shí)驗(yàn)完成周期及交付標(biāo)準(zhǔn)

1.實(shí)驗(yàn)周期: 1-2周

2.交付標(biāo)準(zhǔn):蠟塊、切片、染色圖片.實(shí)驗(yàn)報(bào)告(實(shí)驗(yàn)步驟、試劑、耗材等)

 

需確認(rèn)的信息

1.樣本的種屬.

2.樣本的類型(固定的組織or蠟塊or切片)

3.是否提供試劑盒

4.拍照要求

 

實(shí)驗(yàn)代做服務(wù):

ELISA試劑盒免費(fèi)代檢測(cè)

CCK8檢測(cè)

基因組DNA提取

 

蛋白相互作用分析

Western Blot

 

免疫組化

熒光定量PCR

動(dòng)物模型服務(wù)

流式細(xì)胞檢測(cè)

細(xì)胞增殖

激光共聚焦

DNA甲基化實(shí)驗(yàn)

細(xì)胞劃痕

鈣離子濃度檢測(cè)

掃描電鏡實(shí)驗(yàn)

microRNA 測(cè)序

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

Taqman探針

ATP/ADP檢測(cè)

 

石蠟/冰凍切片

定點(diǎn)突變

線粒體膜電位(MMP)檢測(cè)

細(xì)胞生長(zhǎng)曲線的測(cè)定

藥理毒理動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

 

免疫共沉淀

真核表達(dá)載體構(gòu)建

染色質(zhì)免疫沉淀CHIP

非標(biāo)定量(Label-free)實(shí)驗(yàn)

HE染色代做

承接實(shí)驗(yàn)外包服務(wù):$r$n一、分子生物學(xué)檢測(cè)服務(wù)$r$n二、病理形態(tài)學(xué)

VonKossa染色實(shí)驗(yàn)服務(wù)

提供商: 上海研謹(jǐn)生物$r$n服務(wù)名稱:

透射電鏡服務(wù)實(shí)驗(yàn)服務(wù)

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