簡介

腫瘤是威脅人類健康的zui嚴(yán)重的疾病之一，傳統(tǒng)的治療手段，如手術(shù)、放射或化學(xué)治療等，都會(huì)造成一定程度的非選擇性細(xì)胞毒性作用，而具有較好靶向性的抗腫瘤藥物又面臨耐藥性的影響。針對(duì)后者，已有多種不同的納米載體用于藥物的體內(nèi)輸送，以優(yōu)化藥物的生物活性和藥動(dòng)學(xué)特性。

聚合物囊泡因具有與活細(xì)胞器相似的結(jié)構(gòu)，而得到了廣泛的關(guān)注。與傳統(tǒng)磷脂類載體相比，這種具有良好生物相容性的可降解嵌段聚合物囊泡具有較長的體內(nèi)循環(huán)時(shí)間和較高的化學(xué)功能化潛力，可規(guī)避人體免疫系統(tǒng)，并可根據(jù)裝載藥物分子的特性，改變囊泡尺寸等規(guī)格。

但藥物輸送載體包封后的純化問題仍未完善解決，常用的技術(shù)包括超濾及層析等，但其工藝控制要求均較高，特別是當(dāng)載藥載體通過較窄的膜或凝膠通道時(shí)，可能造成囊泡結(jié)構(gòu)破壞和包封藥物釋放。透析是zui傳統(tǒng)、zui溫和的純化技術(shù)，對(duì)載藥囊泡的影響zui小，但透析的難題是，透析多長時(shí)間才能有效去除游離的未包封藥物分子？時(shí)間過短，不足以達(dá)到清除目的，而時(shí)間過長，則可能導(dǎo)致包封藥物泄漏。本文將簡單介紹確定*透析時(shí)間及相關(guān)影響因素的方法，并對(duì)純化后載藥囊泡的釋放特性做初步研究。

實(shí)驗(yàn)

 實(shí)驗(yàn)采用PCL-b-PMPC雙嵌段聚合物和抗腫瘤藥物分子阿霉素（DOX）。實(shí)驗(yàn)首先確認(rèn)透析清除純DOX所需的時(shí)間，即將不同濃度（0.1、0.3及0.5mg/ml）的DOX溶液置于MWCO 8 -10kD的透析膜管內(nèi)，然后置于500mL蒸餾水（透析液）中，于20℃室溫條件下避光透析，190rpm磁力/樣品體積比越高，即膜管外透析液的相對(duì)體積越高，越容易維持膜內(nèi)/外側(cè)的濃度梯度，加快透析，而增加換液頻率也可達(dá)到此效果。綜上，實(shí)驗(yàn)采用透析條件為溫度20℃、磁力攪拌190rpm、500ml透析液，每30min換液。前期純DOX透析實(shí)驗(yàn)為純化時(shí)間確定實(shí)驗(yàn)，故采用相同透析條件。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，0.1、0.3及0.5mg/ml純DOX溶液透析清除率達(dá)到95%所需的時(shí)間分別為7.5、4.5、4.0h，此時(shí)間足以清除相容藥物濃度包封的載藥囊泡中的未包封游離藥物。因包封率過低，則可認(rèn)為包封失敗，即混合液中的游離藥物的量應(yīng)顯著低于藥物的加載量。對(duì)清除游離分子后的樣品進(jìn)行UV檢測，也確認(rèn)了此時(shí)間長度的充分性。

                                                                                                         透析時(shí)間（h）

                                               不同藥物加載量達(dá)到95%清除率所需時(shí)間，藍(lán)色為0.1mg/ml，橙色為0.3mg/ml，綠色為0.5mg/ml。

此外，藥物濃度也會(huì)影響藥物的包封。提高藥物上樣量，即可提高藥物包封量，使用0.5mg/ml的藥物分子，所得包封量約為0.1mg/ml藥物包封量的10倍，而所得囊泡尺寸更高。

載藥囊泡的藥物釋放實(shí)驗(yàn)顯示，雖然在實(shí)驗(yàn)開始階段，不同pH條件下的藥物釋放速率接近，但隨時(shí)間的延長，酸性條件下，藥物釋放速率明顯快于中性條件，原因可能是酸性條件加快的囊泡膜結(jié)構(gòu)的水解，藥物從基質(zhì)水解形成的通道逸出，或者酸性 攪拌，每30min取透析液UV檢測，并置換新鮮透析液。

將不同濃度的等量DOX溶液加入PCL-b-PMPC共聚合物，磁力攪拌12h，以形成聚合物囊泡，并包封藥物。將獲得的含有載藥囊泡和游離藥物的混合液加入透析膜管，按上述相同步驟，透析去除游離藥物分子。處理完成后，以動(dòng)態(tài)光散射法，測定囊泡尺寸。

 此外，實(shí)驗(yàn)檢測了載藥囊泡在不同酸堿性條件下（中性條件pH7.4、酸性條件pH5.0）的釋放特性，即將pH調(diào)節(jié)后的純化載藥囊泡溶液加入透析膜管，于37℃條件下透析，并按一定時(shí)間間隔取透析液檢測。

 結(jié)果

溫度是影響透析的重要因素之一，在較高的溫度條件下，分子擴(kuò)散速率較高，即可縮短小分子的清除時(shí)間，但較高的溫度可能會(huì)破壞囊泡的結(jié)構(gòu)，也降低了實(shí)驗(yàn)的可控性和靈活性，故一般使用室溫條件（20℃），即可滿足實(shí)驗(yàn)要求。同理，在一定范圍內(nèi)，提高攪拌速度也可改善透析效率，但亦可能增加剪切，導(dǎo)致囊泡破壞和藥物泄露。此外，透析液條件下，嵌段之間的排斥反應(yīng)所形成的孔隙，導(dǎo)致藥物分子釋放。

                                                                                                                時(shí)間（h）

                                                                          純化的載藥囊泡的不同pH條件下的釋放特性，藍(lán)色為pH5.0，橙色為pH7.4

討論

透析可有效用于囊泡包封后的純化，其條件溫和，有利于保護(hù)載藥囊泡的完整結(jié)構(gòu)。但針對(duì)不同藥物和載體，需進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，以確定*的透析條件和時(shí)間，以在短而充分的時(shí)間內(nèi)有效清除游離藥物分子，達(dá)到所需的藥物包封效率和純度。此外，獲得的載藥囊泡需保存于合適的緩沖液中，以獲得所需的控釋效果。