BM6002 腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶活性試劑盒淀粉
- 公司名稱 北京諾博萊德科技有限公司
- 品牌 NobleRyder/諾博萊德
- 型號(hào) BM6002
- 產(chǎn)地 北京
- 廠商性質(zhì) 經(jīng)銷商
- 更新時(shí)間 2025/4/23 16:23:57
- 訪問(wèn)次數(shù) 45
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| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 100T/96S |
|---|---|---|---|
| 貨號(hào) | BM6002 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,制藥/生物制藥 |
| 主要用途 | 催化葡萄糖-1-磷酸與ATP 反應(yīng)生成淀粉合成的直接前體ADPG |
腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶（ADP-glucose pyrophosphorylase，AGP）活性測(cè)定試劑盒
（ 微量法 100T/96S）
正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定測(cè)定意義：
AGP (EC 2.7.7.21)主要存在于植物中，催化葡萄糖-1-磷酸與ATP 反應(yīng)生成淀粉合成的直接前體ADPG，是植物淀粉生物合成的主要限速步驟。
測(cè)定原理：
AGP 催化的逆向反應(yīng)生成 G1P，在反應(yīng)體系中添加的磷酸己糖變位酶和 6-磷酸葡萄糖脫氫酶依次催化生成 6-磷酸葡萄糖酸和 NADPH，340nm 下測(cè)定NADPH 增加速率，即可計(jì)算AGP 活性。
腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶活性試劑盒淀粉
組成：
組分名稱 | BM6002-100T/96S | Storage |
提取液：液體 | 100ml | 4℃ |
試劑一：液體 | 20ml | 4℃ |
試劑二：粉劑 | 1 瓶 | 4℃ |
試劑三：粉劑 | 1 瓶 | -20℃ |
說(shuō)明書(shū) | 一份 | |
試劑二：粉劑×1 瓶，4℃保存；臨用前加入 9mL 蒸餾水充分溶解備用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融；
試劑三：粉劑×1 瓶，-20℃保存；臨用前加入 4mL 蒸餾水充分溶解備用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融；
具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)的參數(shù)為準(zhǔn)
自備儀器和用品：
紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研缽、冰和蒸餾水
粗酶液制備：
按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。10000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。
測(cè)定步驟：
1、分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 340nm，蒸餾水調(diào)零。
2、試劑一置 30℃保溫 10min 以上。
3、在EP 管中按順序加入下列試劑
試劑名稱（μL） | 測(cè)定管 |
試劑一 | 50 |
試劑二 | 80 |
樣本 | 10 |
混勻，30℃保溫 15 min，置沸水浴中 1 min（蓋緊，防止水分散失），冰浴迅速冷卻后，4000g4℃離心 5min，取上清液，在 96 孔板中依次加入下列試劑
上清液 | 80 |
試劑一 | 85 |
試劑三 | 35 |
混勻后，立即于 340 nm 波長(zhǎng)下記錄初始吸光度A1 和 2min 后的吸光度A2，計(jì)算ΔA=A2-A1。
AGP 活性計(jì)算：
a. 使用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下：
1、按樣本蛋白蛋白濃度計(jì)算
單位的定義：每mg 組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生 1nmol NADPH 定義為一個(gè)酶活性單位。
AGP（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(V 樣×Cpr) ÷T×稀釋倍數(shù)
=2813×ΔA÷Cpr
此法需要自行測(cè)定樣本蛋白質(zhì)濃度。
2、按照樣本鮮重計(jì)算
單位的定義：每g 組織每分鐘催化產(chǎn)生 1nmol NADPH 定義為一個(gè)酶活力單位。
AGP（nmol/min /g 鮮重）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷（W× V 樣÷V 樣總）÷T×稀釋倍數(shù)
=2813×ΔA÷W
V 反總：反應(yīng)體系總體積，2×10-4 L；ε：NADPH 摩爾消光系數(shù)，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V 樣：加入樣本體積，0.01mL；V 樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應(yīng)時(shí)間，2 min；稀釋倍數(shù)：1.75；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量。
b. 使用 96 孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下：
1、按樣本蛋白蛋白濃度計(jì)算
單位的定義：每mg 組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生 1nmol NADPH 定義為一個(gè)酶活性單位。
AGP（nmol/min /mg prot）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(V 樣×Cpr) ÷T×稀釋倍數(shù)
=5627×ΔA÷Cpr
此法需要自行測(cè)定樣本蛋白質(zhì)濃度。
2、按照樣本鮮重計(jì)算
單位的定義：每g 組織每分鐘催化產(chǎn)生 1nmol NADPH 定義為一個(gè)酶活力單位。
AGP（nmol/min /g 鮮重）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷（W ×V 樣÷V 樣總）÷T×稀釋倍數(shù)
=5627×ΔA÷W
V 反總：反應(yīng)體系總體積，2×10-4 L；ε：NADPH 摩爾消光系數(shù)，6.22×103 L / mol /cm；d：96 孔板光徑，0.5cm；V 樣：加入樣本體積，0.01 mL；V 樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應(yīng)時(shí)間，2 min；稀釋倍數(shù)：1.75；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量。
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