化工儀器網(wǎng)>產(chǎn)品展廳>試劑標(biāo)物>行業(yè)專(zhuān)用試劑>生化與分子生物學(xué)用試劑>BK6013 線粒體蘋(píng)果酸脫氫酶試劑盒 三羧酸循環(huán)系列
BK6013 線粒體蘋(píng)果酸脫氫酶試劑盒 三羧酸循環(huán)系列
- 公司名稱(chēng) 北京諾博萊德科技有限公司
- 品牌 NobleRyder/諾博萊德
- 型號(hào) BK6013
- 產(chǎn)地
- 廠商性質(zhì) 經(jīng)銷(xiāo)商
- 更新時(shí)間 2025/4/19 17:00:14
- 訪問(wèn)次數(shù) 46
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| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 50T/48S |
|---|---|---|---|
| 貨號(hào) | BK6013 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,制藥/生物制藥 |
| 主要用途 | 線粒體蘋(píng)果酸脫氫酶試劑盒 |
線粒體蘋(píng)果酸脫氫酶（MDHm）試劑盒說(shuō)明書(shū)
分光光度法 50 管/48 樣
正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定測(cè)定意義：
MDH （EC 1.1.1.37）廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，線粒體中MDH 是TCA 循環(huán)的關(guān)鍵酶之一，催化蘋(píng)果酸形成草酰乙酸；相反，胞漿中 MDH 催化草酰乙酸形成蘋(píng)果酸。草酰乙酸是重要的中間產(chǎn)物， 連接多條重要的代謝途徑。因此，MDH 在細(xì)胞多種生理活動(dòng)中扮演著重要的角色，包括線粒體的能量代謝、 蘋(píng)果酸-天冬氨酸穿梭系統(tǒng)、活性氧代謝和抗病性等。根據(jù)不同的輔酶特異性，MDH分為NAD-依賴(lài)的MDH 和NADP-依賴(lài)的MDH，細(xì)菌中通常只含有 NAD-MDH，在真核細(xì)胞中，NAD-MDH分布于細(xì)胞質(zhì)和線粒體中。
測(cè)定原理：
催化NADH 還原草酰乙酸生成蘋(píng)果酸，導(dǎo)致 340nm 處光吸收下降。
線粒體蘋(píng)果酸脫氫酶試劑盒 三羧酸循環(huán)系列
組成：
產(chǎn)品名稱(chēng) | BK6013-50T/48S | Storage |
試劑一：液體 | 50ml | -20℃ |
試劑二：液體 | 10ml | -20℃ |
試劑三：液體 | 1ml | -20℃ |
試劑四：液體 | 50ml | 4℃ |
試劑五：粉劑 | 2 支 | -20℃ |
試劑六：粉劑 | 2 支 | -20℃ |
說(shuō)明書(shū) | 一份 | |
試劑五、粉劑×2 支，-20℃保存；臨用前加入 300μl 蒸餾水，充分溶解待用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。
試劑六、粉劑×2 支，-20℃保存；臨用前加入 300μl 蒸餾水，充分溶解待用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。
具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)的參數(shù)為準(zhǔn)
自備儀器和用品：
紫外分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1 ml 石英比色皿和蒸餾水。
樣本測(cè)定的準(zhǔn)備：
組織、細(xì)菌或細(xì)胞中胞漿蛋白與線粒體蛋白的分離：
稱(chēng)取約 0.1g 組織或收集 500 萬(wàn)細(xì)胞，加入 1ml 試劑一和 10μl 試劑三，用冰浴勻漿器或研缽勻漿。將勻漿液于 600g，4℃離心 5min。
棄沉淀，將上清液移至另一離心管中，11000g，4℃離心 10min。
上清液即胞漿提取物，可用于測(cè)定從線粒體泄漏的 MDH（此步可選做）。
在步驟④中的沉淀中加入 200μl 試劑二和 2μl 試劑三，超聲波破碎（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3 秒，間隔 10 秒，重復(fù) 30 次），用于線粒體 MDH 測(cè)定。
測(cè)定步驟：
1、分光光度計(jì)預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 340nm，蒸餾水調(diào)零。
2、將試劑四在 37℃（哺乳動(dòng)物）或 25℃（其它物種）水浴 10min 以上。
3、操作表：
試劑名稱(chēng)（μl） | 測(cè)定孔 |
樣本 | 20 |
試劑四 | 760 |
試劑五 | 10 |
試劑六 | 10 |
將上述試劑按順序加入 1 ml 石英比色皿中，混勻后立即在 340 nm 波長(zhǎng)下記錄初始吸光度 A1 和反應(yīng) 1min
后的吸光度A2，計(jì)算ΔA=A1-A2。計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。
MDHm 活力單位的計(jì)算：
（1） 按樣本蛋白濃度計(jì)算：
單位的定義：每mg 組織蛋白每分鐘消耗 1 nmol 的NADH 定義為一個(gè)酶活力單位。
MDHm（nmol/min/mg prot）=[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(V 樣×Cpr) ÷T=6430×ΔA÷Cpr
（2） 按樣本鮮重計(jì)算：
單位的定義：每g 組織每分鐘消耗 1 nmol 的NADH 定義為一個(gè)酶活力單位。
MDHm（nmol/min/g 鮮重）=[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷（W× V 樣÷V 樣總）÷T =1299×ΔA÷W
（3） 按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算：
單位的定義：每 1 萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘消耗 1 nmol 的NADH 定義為一個(gè)酶活力單位。
MDHm（nmol/min/104 cell）=[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷（2000×V 樣÷V 樣總）÷T=0.65×ΔA
V 反總：反應(yīng)體系總體積，8×10-4 L；ε：NADH 摩爾消光系數(shù)，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm； V 樣：加入樣本體積，0.02ml；V 樣總：加入提取液體積，0.202 ml；T：反應(yīng)時(shí)間，1 min；W：樣本質(zhì)量， g；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；2000：細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù)，2000 萬(wàn)。
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