BJ6005 己糖激酶試劑盒 糖酵解系列-常備現(xiàn)貨
- 公司名稱 北京諾博萊德科技有限公司
- 品牌 NobleRyder/諾博萊德
- 型號 BJ6005
- 產(chǎn)地
- 廠商性質(zhì) 經(jīng)銷商
- 更新時間 2025/4/14 8:14:47
- 訪問次數(shù) 45
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| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 50T/48S |
|---|---|---|---|
| 貨號 | BJ6005 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,制藥/生物制藥 |
| 主要用途 | 己糖激酶試劑盒 |
己糖激酶(hexokinase，HK)試劑盒說明書
分光光度法 50 管/48 樣
正式測定前務(wù)必取 2-3 個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定測定意義：
HK（EC 2.7.1.1）廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中，是葡萄糖分解過程中的第一個關(guān)鍵酶，催化葡萄糖轉(zhuǎn)化為 6-磷酸葡萄糖，6-磷酸葡萄糖是糖酵解和磷酸戊糖途徑的交叉點。
測定原理：
HK 催化葡萄糖合成 6-磷酸葡萄糖，6-磷酸葡萄糖脫氫酶進一步催化 6-磷酸葡萄糖脫氫生成 NADPH， NADPH 在 340nm 有特征吸收峰。
己糖激酶試劑盒 糖酵解系列-常備現(xiàn)貨
組成：
產(chǎn)品名稱 | BJ6005-50T/48S | Storage |
提取液：液體 | 60ml | 4℃ |
試劑一：液體 | 30ml | 4℃ |
試劑二：粉劑 | 1 瓶 | 4℃ |
試劑三：液體 | 5 ml | 4℃ |
試劑四：粉劑 | 1 支 | -20℃ |
試劑五：粉劑 | 1 支 | -20℃ |
試劑六：粉劑 | 1 支 | -20℃ |
說明書 | 一份 | |
試劑二：粉劑×1 瓶，4℃保存；臨用前加入 30ml 蒸餾水充分溶解備用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。
試劑四：粉劑×1 支，-20℃保存，臨用前加入 4ml 蒸餾水充分溶解備用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。
試劑五：粉劑×1 支，-20℃保存；臨用前加入 2ml 蒸餾水充分溶解備用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。
試劑六：粉劑×1 支，-20℃保存；臨用前加入 250μl 試劑一和 250μl 蒸餾水充分溶解備用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。
具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準
自備儀器和用品：
紫外分光光度計、恒溫水浴鍋、臺式離心機、可調(diào)式移液器、1 ml 石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
樣本的前處理：
1、細菌或培養(yǎng)細胞：先收集細菌或細胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細菌或細胞數(shù)量（104 個）：提取液體積（ml）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細菌或細胞加入 1ml 提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次）；8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。
2、組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1ml 提取液），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。
3、血清（漿）樣品：直接檢測。
測定步驟：
1、分光光度計預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長至 340nm，蒸餾水調(diào)零。
2、將試劑一、二、三、四和五 37℃(哺乳動物)或 25℃(其它物種)預(yù)熱 10 分鐘。
3、加樣表：
試劑名稱（μl） | 測定管 |
試劑一 | 400 |
試劑二 | 400 |
試劑三 | 80 |
試劑四 | 80 |
試劑五 | 40 |
試劑六 | 8 |
樣本 | 30 |
將上述試劑按順序加入 1 ml 石英比色皿中，立即混勻，加樣本的同時開始計時，在 340 nm 波長下記錄 20秒時的初始吸光度A1 和 5 分 20 秒時的吸光度 A2，計算ΔA=A2-A1。
注意事項：
1、為了減小操作誤差，建議將試劑一、二、三、四、五按比例配成混合液，預(yù)熱 10min，取 30μl 樣本+8μl試劑六+1ml 混合液，混勻后按照上述步驟檢測。
2、不同勻漿組織中 HK 活力不一樣，做正式試驗之前請做 1-2 只預(yù)試，若ΔA>0.5，則說明組織活力太高，必須用提取液稀釋成適當濃度勻漿上清液（計算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)），或縮短反應(yīng)時間至 2min,使 ΔA<0.5，以提高檢測靈敏度。
HK 活性計算：
1、血清（漿）HK 活性
單位的定義：每毫升血清（漿）在每分鐘生成 1 nmol 的NADPH 定義為一個酶活力單位。
HK（nmol/min/ml）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷V 樣÷T=1113×ΔA 2、組織、細菌或細胞中 HK 活性
（1） 按樣本蛋白濃度計算
單位的定義：每mg 組織蛋白每分鐘生成 1 nmol 的NADPH 定義為一個酶活力單位。
HK（nmol/min /mg prot）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(V 樣×Cpr) ÷T=1113×ΔA÷Cpr
（2） 按樣本鮮重計算
單位的定義：每g 組織每分鐘生成 1 nmol 的NADPH 定義為一個酶活力單位。
HK（nmol/min /g 鮮重）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(W ×V 樣÷V 樣總) ÷T=1113×ΔA÷W
（3） 按細菌或細胞密度計算
單位的定義：每 1 萬個細菌或細胞每分鐘生成 1 nmol 的NADPH 定義為一個酶活力單位。
HK（nmol/min /104 cell）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(500×V 樣÷V 樣總) ÷T=2.226×ΔA
V 反總：反應(yīng)體系總體積，1.038×10-3 L；ε：NADPH 摩爾消光系數(shù)，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V 樣：加入樣本體積，0.03 ml；V 樣總：加入提取液體積，1 ml；T：反應(yīng)時間，5 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g；500：細菌或細胞總數(shù)，500 萬。
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