支原體肉湯培養(yǎng)基的實(shí)驗(yàn)方法與操作步驟！

支原體肉湯培養(yǎng)基的實(shí)驗(yàn)方法與操作步驟！

一、基本信息

平臺(tái)編號(hào)：bio-55787

規(guī)格：250g

英文名稱(chēng)：Mycoplasma Broth Medium

名稱(chēng)：支原體肉湯培養(yǎng)基

用途：用于培養(yǎng)支原體的基礎(chǔ)培養(yǎng)基

注意事項(xiàng)：僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類(lèi)或動(dòng)物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用

二、成分（g/L）

豬胃消化物 10.0

牛肉浸粉 5.0

酵母浸粉 5.0

氯化鈉 2.5

葡萄糖 5.0

酚紅 0.02

pH值7.6±0.2 25℃

三、用法

稱(chēng)取本品 27.52g,加熱溶解于 800ml  蒸餾水中,121℃高壓滅菌 15 分鐘,冷至室溫,無(wú)菌操作加入 滅活小牛血清或馬血清 200ml 和 80 萬(wàn)單位,混勻,分裝無(wú)菌試管,備用。

四、操作步驟

1、準(zhǔn)確稱(chēng)量試劑：根據(jù)不同的菌類(lèi)和用途，選擇適宜的培養(yǎng)基，培養(yǎng)基所需試劑必須純凈。

2、校正pH值：將稱(chēng)量好的培養(yǎng)基各種成分放入容器內(nèi)，標(biāo)記劃線(xiàn)，加熱溶解，補(bǔ)充水分，測(cè)定酸堿度，常用pH6.8～8.0的精密試紙或酸度計(jì)測(cè)定。用1N NaOH和1N HCl調(diào)節(jié)pH值到適宜范圍內(nèi)。

3、過(guò)濾：將玻璃漏斗置鐵架上，再用紗布夾棉花或用濾紙放在漏斗中，將上述培養(yǎng)基倒入其中過(guò)濾至透明。

4、分裝：將過(guò)濾后的培養(yǎng)基分裝于中試管或三角瓶?jī)?nèi)（試管內(nèi)每支裝5mL；三角瓶中裝100～150ml），塞好棉塞用牛皮紙包扎好，準(zhǔn)備滅菌。

5、滅菌：培養(yǎng)基的滅菌，常用高壓蒸汽滅菌法。一般微生物的營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞在水中煮沸后即被殺死，但細(xì)菌的芽胞有較強(qiáng)的抗熱性，須經(jīng)高壓蒸汽滅菌才能達(dá)到滅菌的目的。根據(jù)蒸汽溫度隨壓力升高而上升的原理，即壓力越大，蒸汽溫度就越高。因此，在同一溫度條件下，采用高壓蒸汽滅菌比干熱滅菌法效果要好。而且在濕熱情況下，菌體吸收水分后，其蛋白質(zhì)易于凝固變性，因?yàn)檎羝拇┩噶?qiáng)，殺菌效果好。

五、實(shí)驗(yàn)方法

1、產(chǎn)品名稱(chēng)培養(yǎng)基陽(yáng)性組：取稀釋后的各試驗(yàn)菌懸液1ml分別加于預(yù)先制備的試管培養(yǎng)基中，每種細(xì)菌接種兩支試管。同時(shí)分別取1ml菌懸液加于無(wú)菌空平皿中，用于計(jì)數(shù)，每種細(xì)菌做兩個(gè)平板。

2、培養(yǎng)基陰性組：即空白對(duì)照，即不添加菌液。

3、接種量計(jì)數(shù)：步驟1中的平皿中，細(xì)菌傾注胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基，霉菌和白色念珠菌傾注沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基。同時(shí)每種培養(yǎng)基做1個(gè)空白。

4、培養(yǎng)條件：

無(wú)菌檢查：20～25℃培養(yǎng)14天或直至出現(xiàn)渾濁（不超過(guò)14天）

MPN計(jì)數(shù)：30～35℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3天

控制菌檢查：30～35℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)18～24小時(shí)

傾注計(jì)數(shù)用的的胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基平板置30～35℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3天

傾注計(jì)數(shù)用的沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基平板置20～25℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3～5天

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