1 前言

在微生物學(xué)研究中，培養(yǎng)基扮演著至關(guān)重要的角色，它為微生物的生長(zhǎng)提供了一個(gè)可靠的環(huán)境，是其生長(zhǎng)繁衍的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)。其中，不含凝固劑（如瓊脂）、呈液體狀態(tài)的培養(yǎng)基，我們稱為液體培養(yǎng)基；呈固體狀態(tài)的培養(yǎng)基為固體培養(yǎng)基。向液體培養(yǎng)基中加入瓊脂后制成的瓊脂固體培養(yǎng)基，是我們?cè)趯?shí)驗(yàn)室中最經(jīng)常用的培養(yǎng)基之一，微生物在固體培養(yǎng)基的表面可形成肉眼可見(jiàn)的菌落。今天我們就來(lái)聊聊固體培養(yǎng)基的配制及儲(chǔ)存注意事項(xiàng)。
 

2 固體培養(yǎng)基的配制

首先，我們需要根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康倪x擇適合的固體培養(yǎng)基配方。常見(jiàn)的固體培養(yǎng)基包括營(yíng)養(yǎng)瓊脂、LB培養(yǎng)基、麥康凱瓊脂等。每種培養(yǎng)基都有其特定的應(yīng)用場(chǎng)景，下面我們簡(jiǎn)單羅列了一些常用的固體培養(yǎng)基的配方及適用場(chǎng)景，供大家參考。

選擇好合適的培養(yǎng)基之后，我們?cè)侔凑者x定的配方準(zhǔn)確稱量所需的物質(zhì)成分。精確的稱量對(duì)于確保培養(yǎng)基的質(zhì)量至關(guān)重要，但我們?cè)俜Q取肯定不能一把就稱到準(zhǔn)確的重量，通常來(lái)說(shuō)，稱取的克重可以大一丟丟，但絕對(duì)不能小，因?yàn)槲覀冊(cè)诩尤氲藉F形瓶里時(shí)不可避免地會(huì)有一些粉末殘留在稱量盤(pán)上，所以稍微大一點(diǎn)沒(méi)關(guān)系，但絕對(duì)不能小于所需克重，因?yàn)橐_保微生物生長(zhǎng)所需要的營(yíng)養(yǎng)條件足夠。
 

例如，要稱取5g的成分的話，5.1g～5.2g之間的任何值都被視為符合要求。但對(duì)于一些微量成分，建議使用能夠精確到0.001g或者更高精度的天平，并且盡可能減少操作誤差，以保證微量成分的準(zhǔn)確性。
 

以LB培養(yǎng)基為例，一般建議在一個(gè)稱量盤(pán)中依次稱量不同的成分，每稱完一個(gè)成分就歸零，向同一個(gè)稱量盤(pán)內(nèi)加入下一個(gè)成分進(jìn)行稱量。這還是因?yàn)槲覀冊(cè)趯⒎勰┘尤氲藉F形瓶里時(shí)，會(huì)有一些粉末殘留在稱量盤(pán)上。如果你用不同的稱量盤(pán)分別稱量那么誤差就會(huì)變大，用同一個(gè)稱量盤(pán)稱量就能減小這部分誤差。
 

稱完后，我們一般先往錐形瓶的瓶底，加一點(diǎn)點(diǎn)水，再加入稱好的粉末，避免粉末直接加到瓶?jī)?nèi)后會(huì)飛散。加入粉末后，搖勻，接著在定容至目標(biāo)體積（需要注意的是，錐形瓶?jī)?nèi)的液體總體積不能超過(guò)容量的2/3）。然后在瓶口處蓋上一張培養(yǎng)基封口膜，用橡皮筋固定住，再在外面覆蓋上一層錫箔紙。

做完上面這些步驟我們就可以將配好的培養(yǎng)基放到高壓滅菌鍋內(nèi)進(jìn)行滅菌啦！
 

滅完菌，待培養(yǎng)基稍稍冷卻之后，我們就可以準(zhǔn)備倒平板了，具體的溫度大約是50°C我們可以試著用手去摸瓶壁，摸著稍稍燙手即可。然后在超凈臺(tái)內(nèi)，迅速倒入無(wú)菌的培養(yǎng)皿中，倒入的量不必精確，但要確保覆蓋整個(gè)皿的底面，對(duì)于標(biāo)準(zhǔn)尺寸的培養(yǎng)皿來(lái)說(shuō)，大約是20mL。
 

培養(yǎng)基冷卻后，它就會(huì)凝固并變成不透明的，但所有凝固完需要的時(shí)間一般會(huì)比較久。一般倒完平板后就放在超凈臺(tái)內(nèi)，開(kāi)抽風(fēng)，不要開(kāi)紫外，玻璃擋板留一小條縫，放置過(guò)夜。最好寫(xiě)一張便簽貼，標(biāo)明一下你在冷卻平板，貼在超凈臺(tái)明顯的位置，防止有些同學(xué)不知道，誤用了你在晾平板的超凈臺(tái)，導(dǎo)致你的平板受到污染。
 

平板冷卻凝固后，將培養(yǎng)皿倒置過(guò)來(lái)，以防止在瓊脂表面凝結(jié)。然后將倒置的培養(yǎng)基裝進(jìn)大小合適的保鮮袋內(nèi)，并在保鮮袋上標(biāo)記好對(duì)應(yīng)培養(yǎng)基的名稱及配制日期，放入4℃冰箱保存即可。

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