無外泌體胎牛血清 FBS050-EXO|WINSERA

名稱：無外泌體胎牛血清

貨號： FBS050-EXO

規(guī)格：50ML

品牌：WINSERA

在細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中，胎牛血清（FBS）一直是不能缺少的營養(yǎng)補(bǔ)充劑。然而，傳統(tǒng)FBS中含有大量外泌體，可能干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果，特別是在干細(xì)胞研究、腫瘤微環(huán)境分析及外泌體相關(guān)實(shí)驗(yàn)中。蘇州千舍生物科技有限公司推出的無外泌體特級胎牛血清（Exosome-Free FBS），通過超高速離心結(jié)合納米過濾技術(shù)，有效去除外泌體，確保實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性和可重復(fù)性。

關(guān)鍵優(yōu)勢：

高純度：外泌體去除率>99%，避免外源性RNA、蛋白質(zhì)干擾

高穩(wěn)定性：批次間差異極小，適用于長期實(shí)驗(yàn)

低內(nèi)毒素：<1 EU/mL，減少細(xì)胞毒性風(fēng)險(xiǎn)

1、培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)，如何去除血清來源的外泌體？    

多數(shù)情況下，細(xì)胞在體外培時(shí)養(yǎng)需要血清，而血清中一般都含有外泌體，為避免血清對細(xì)胞外泌體的污染，可采用以下兩種方法： （1）將細(xì)胞培養(yǎng)用的血清通過100000 g超速離心10h以去除血清外泌體； （2）選擇無血清培養(yǎng)基進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)。  

2、無外泌體血清培養(yǎng)基（或者無血清培養(yǎng)基）在什么時(shí)候使用？    

細(xì)胞在正常含血清的培養(yǎng)基中培養(yǎng)一定的時(shí)間后，細(xì)胞融合度約為60%-70%時(shí)，移去原有含血清的培養(yǎng)基，換成新鮮的無外泌體血清培養(yǎng)基（或者無血清培養(yǎng)基），繼續(xù)培養(yǎng)24-48h，細(xì)胞融合度達(dá)到80%-95%左右時(shí)收取上清，該上清液即可用于提取外泌體。   

3、細(xì)胞培養(yǎng)過程中的死細(xì)胞是否會影響外泌體的提取？    會的。在收獲細(xì)胞時(shí)，應(yīng)確定死亡細(xì)胞占比不超過5%。細(xì)胞凋亡/死亡過程中會釋放大量大小不等的囊泡，它們在外泌體的提取純化過程中會污染活細(xì)胞產(chǎn)生的外泌體。  

4、準(zhǔn)備做細(xì)胞外泌體Small RNA的NGS測序，初始樣品量需要準(zhǔn)備多少？    普通腫瘤細(xì)胞系推薦使用40mL以上的初始樣品量。由于某些細(xì)胞（如懸浮細(xì)胞、干細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞等）中外泌體含量比較低，建議先通過10kD超濾柱濃縮，準(zhǔn)備40mL以上的濃縮液再進(jìn)行超速離心分離外泌體，一般需提取到20ng以上的Total RNA。  

5、進(jìn)行外泌體RNA RT-PCR實(shí)驗(yàn)推薦什么內(nèi)參？    取決于具體樣品，可以選擇外源添加cel-miR-39-3p，或內(nèi)源U6、SNORD61、SNORD68、SNORD72作為內(nèi)參。    

6、提取的外泌體進(jìn)行Western blot前是否需要加入RIPA試劑裂解？    需要，一般按照1:1的比例加入RIPA試劑。  

7、進(jìn)行外泌體Western blot鑒定時(shí)有無內(nèi)參蛋白可供選擇？    無，該檢測屬于定性檢測，更多的是用等蛋白定量校準(zhǔn)樣品間的差異。

8、組織細(xì)胞外泌體如何提??？    無菌環(huán)境下將組織剪成小塊（越小越好），然后在無血清的培養(yǎng)基中培養(yǎng)12h；將培養(yǎng)液轉(zhuǎn)移至離心管中，于4℃以3000g離心20 min去除培養(yǎng)液中雜質(zhì)和細(xì)胞碎片，將上清液轉(zhuǎn)移至新的離心管中；先使用0.45μm濾器過濾上清液，接著使用0.2μm濾器過濾上清液，再進(jìn)行超速離心分離外泌體。有條件的話建議采用Transwell小室培養(yǎng)的方式，效果更佳。    

9、如何鑒定提取的外泌體？     

 通常使用透射電鏡檢測（形態(tài)）、粒徑檢測（大?。?/span>Western blot檢測等方法鑒定提取的外泌體。在進(jìn)行Western blot檢測時(shí)，通常檢測外泌體標(biāo)志蛋白（CD63、CD9、CD81、TSG101等），按照國際細(xì)胞外囊泡協(xié)會的建議為檢測2個陽性和1個陰性指標(biāo)。

10、粘度過大的樣品如何處理？    如果樣品粘度過大時(shí)（因細(xì)胞分泌物較多所致），可將樣品用1×PBS緩沖液進(jìn)行等體積稀釋。

11、外泌體電鏡是不是一定要有膜結(jié)構(gòu)？

 負(fù)染電鏡結(jié)果中外泌體的形態(tài)是那種明顯的茶托樣，邊緣有一圈略微更明亮的亮圈。如果結(jié)構(gòu)是沒有膜結(jié)構(gòu)的圓球形，很可能是脂蛋白顆粒或者抱團(tuán)的蛋白質(zhì)。    

12、分離外泌體前能加RNA保護(hù)劑嗎？    分離外泌體前的樣品不能加入任何RNA保護(hù)劑（如Trizol）。