手機(jī)版
化工儀器網(wǎng)手機(jī)版
化工儀器網(wǎng)小程序
官方微信
公眾號：chem17
掃碼關(guān)注視頻號
實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀技術(shù)詳解與應(yīng)用探索
一、技術(shù)詳解
基本原理
實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qPCR)技術(shù)是在傳統(tǒng)PCR基礎(chǔ)上，通過引入熒光標(biāo)記和實(shí)時(shí)監(jiān)測技術(shù)，實(shí)現(xiàn)對核酸擴(kuò)增過程的實(shí)時(shí)監(jiān)控和定量分析。在PCR反應(yīng)體系中加入熒光染料或特異性探針，隨著PCR反應(yīng)的進(jìn)行，熒光信號強(qiáng)度與PCR產(chǎn)物的量成正比，通過監(jiān)測熒光信號的變化，可以精確計(jì)算目標(biāo)基因的初始拷貝數(shù)。
關(guān)鍵組件
熒光定量系統(tǒng)：用于監(jiān)測循環(huán)過程中的熒光信號變化。
計(jì)算機(jī)：收集熒光數(shù)據(jù)，并通過實(shí)時(shí)分析軟件以圖表形式顯示。
溫控系統(tǒng)：確保PCR反應(yīng)在精確的溫度條件下進(jìn)行。
光學(xué)系統(tǒng)：包括光源和檢測器，用于激發(fā)和檢測熒光信號。
熒光標(biāo)記方法
熒光染料法(如SYBR Green I)：染料與雙鏈DNA非特異性結(jié)合，熒光信號強(qiáng)度與雙鏈DNA的數(shù)量成正比。優(yōu)點(diǎn)是成本低、操作簡便，但可能產(chǎn)生假陽性結(jié)果。
熒光探針法(如TaqMan探針)：探針與目標(biāo)DNA序列特異性結(jié)合，探針兩端分別標(biāo)記熒光報(bào)告基團(tuán)和淬滅基團(tuán)。當(dāng)探針被Taq酶切割時(shí)，熒光信號釋放。優(yōu)點(diǎn)是特異性高、重復(fù)性好，但成本較高。
數(shù)據(jù)分析
Ct值：熒光信號達(dá)到設(shè)定閾值時(shí)的PCR循環(huán)數(shù)，與初始模板量成反比。
標(biāo)準(zhǔn)曲線：通過已知拷貝數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)品繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，用于計(jì)算未知樣品的初始拷貝數(shù)。
二、應(yīng)用探索
醫(yī)療診斷
病原體檢測：快速、準(zhǔn)確地檢測病毒、細(xì)菌等病原體的核酸載量，如新冠病毒、乙肝病毒、丙肝病毒等。
腫瘤診斷：檢測腫瘤相關(guān)基因的突變、融合和表達(dá)異常，為個(gè)性化治療提供依據(jù)。
遺傳病篩查：檢測與遺傳性疾病相關(guān)的基因變異，如單核苷酸多態(tài)性(SNP)。
科研領(lǐng)域
基因表達(dá)分析：實(shí)時(shí)追蹤PCR反應(yīng)中的熒光信號變動(dòng)，精確測量特定基因的表達(dá)水平。
基因突變檢測：用于癌癥研究、遺傳病診斷等。
SNP分析：廣泛應(yīng)用于遺傳學(xué)研究和個(gè)性化醫(yī)療。
食品安全
食源性病原體檢測：檢測食品中的沙門氏菌、大腸桿菌等病原體。
轉(zhuǎn)基因成分檢測：檢測食品中的轉(zhuǎn)基因成分，確保食品安全。
環(huán)境監(jiān)測
水體、土壤微生物檢測：監(jiān)測環(huán)境中的微生物污染情況，為環(huán)境保護(hù)和生態(tài)修復(fù)提供技術(shù)支持。
其他領(lǐng)域
動(dòng)物健康檢測：檢測動(dòng)物體內(nèi)的病原體，預(yù)防和控制動(dòng)物疾病。
法醫(yī)學(xué)：用于個(gè)體識別、親子鑒定等。
三、技術(shù)優(yōu)勢
高靈敏度：能夠檢測到極微量的核酸分子，即使是單個(gè)拷貝的目標(biāo)基因也能被準(zhǔn)確識別。
高特異性：通過特異性探針或引物設(shè)計(jì)，確保只擴(kuò)增目標(biāo)序列，減少非特異性擴(kuò)增。
實(shí)時(shí)監(jiān)測：在PCR擴(kuò)增過程中實(shí)時(shí)檢測熒光信號變化，實(shí)現(xiàn)定量分析。
操作簡便：自動(dòng)化程度高，減少了人為因素的干擾，降低了實(shí)驗(yàn)誤差。
四、未來展望
隨著生命科學(xué)的不斷發(fā)展和技術(shù)的持續(xù)創(chuàng)新，實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀的應(yīng)用范圍將不斷拓展。未來，它將在更多領(lǐng)域發(fā)揮重要作用，如農(nóng)業(yè)、環(huán)境監(jiān)測、食品安全等。同時(shí)，新型熒光探針和檢測技術(shù)的不斷涌現(xiàn)將進(jìn)一步提升儀器的性能，使其能夠檢測到更低濃度的核酸分子，實(shí)現(xiàn)更精準(zhǔn)的定量分析。
相關(guān)產(chǎn)品
免責(zé)聲明
- 凡本網(wǎng)注明“來源：化工儀器網(wǎng)”的所有作品，均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡(luò)有限公司-化工儀器網(wǎng)合法擁有版權(quán)或有權(quán)使用的作品，未經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)不得轉(zhuǎn)載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)使用作品的，應(yīng)在授權(quán)范圍內(nèi)使用，并注明“來源：化工儀器網(wǎng)”。違反上述聲明者，本網(wǎng)將追究其相關(guān)法律責(zé)任。
- 本網(wǎng)轉(zhuǎn)載并注明自其他來源（非化工儀器網(wǎng)）的作品，目的在于傳遞更多信息，并不代表本網(wǎng)贊同其觀點(diǎn)和對其真實(shí)性負(fù)責(zé)，不承擔(dān)此類作品侵權(quán)行為的直接責(zé)任及連帶責(zé)任。其他媒體、網(wǎng)站或個(gè)人從本網(wǎng)轉(zhuǎn)載時(shí)，必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來源，并自負(fù)版權(quán)等法律責(zé)任。
- 如涉及作品內(nèi)容、版權(quán)等問題，請?jiān)谧髌钒l(fā)表之日起一周內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系，否則視為放棄相關(guān)權(quán)利。
采購中心