2025 年版《中國藥典》III 部新增了糖蛋白的糖基化分析等 5 個(gè)指導(dǎo)原則以及修訂了包括N糖譜測(cè)定法等近 20 個(gè)通則。這些新增指導(dǎo)原則與通則不斷提升標(biāo)準(zhǔn)的精確性與針對(duì)性，并補(bǔ)充了更精準(zhǔn)的測(cè)定方法與分析技術(shù)，有力地確保了產(chǎn)品的質(zhì)量和穩(wěn)定性。

我們對(duì)糖基化分析指導(dǎo)原則（圖 1）和 N-糖譜測(cè)定法（表 1）更新總結(jié)如下：

通過表 1，可以發(fā)現(xiàn)液相色譜/質(zhì)譜 (LC/MS) 系統(tǒng)已廣泛用于分析完整蛋白和亞基水平，肽段水平，以及表征  PTM。

安捷倫為糖基化提供完整糖蛋白、糖肽、寡糖、單糖的全面分析（圖 2）。包括：

根據(jù)蛋白的復(fù)雜性、與藥物安全有效的相關(guān)性以及生產(chǎn)監(jiān)控策略的總體設(shè)計(jì)等，安捷倫對(duì)不同水平的主要工作流程進(jìn)行了相關(guān)研究。

Ⅰ.完整蛋白/亞基水平

在完整蛋白質(zhì)水平表征 mAb 糖型，是快速評(píng)價(jià)和監(jiān)控 mAb 糖基化最為常用的方法。以 NIST mAb 為例（圖 3），主要糖型均獲得了低至 ppm 級(jí)的誤差和出色的譜圖清晰度，同時(shí)可獲得主要糖型修飾的相對(duì)比例。其他較小的糖基化異質(zhì)性（例如 GlcNAc 殘基缺失），也可輕松鑒定。

rhEPO（重組人促紅細(xì)胞生成素）是一種活性糖蛋白。由于其糖基化位點(diǎn)多，糖型結(jié)構(gòu)復(fù)雜，一直被視為糖基化表征的難題。從圖 4 可以看出，完整的 rhEPO 分子量分布在 30KDa 左右，而其氨基酸序列的分子量僅不到 20KDa，因此糖含量高達(dá) 50% 以上。

在游離寡糖水平的鑒別和定量工作中，含高唾液酸的糖蛋白藥物的寡糖結(jié)構(gòu)更加復(fù)雜，因此 2025 版《中國藥典》開發(fā)了針對(duì)的通用方法（圖 1）。安捷倫基于此開發(fā)了一種含高唾液酸糖蛋白藥物的游離寡糖分析方法，使用陰離子交換色譜柱，為這類分子的 N-糖定量提供可重現(xiàn)的高通量解決方案。以康柏西普為例（圖 8），該方案穩(wěn)定可靠，每個(gè)峰所帶的唾液酸數(shù)量均通過標(biāo)準(zhǔn)品定性，并獲得良好分離。

無需額外配備耗材，可快速完成樣品前處理。相比傳統(tǒng)的 2-AB 標(biāo)記，專利的標(biāo)記試劑 InstantPC 熒光強(qiáng)度和質(zhì)譜響應(yīng)高 10 倍以上。

1290 Infinity III Bio 超高效液相色譜儀系統(tǒng)采用生物兼容性流路，減少了待分析物與管路表面的非特異性相互作用。同時(shí)，Infinity Lab Assist 技術(shù)可以使工作效率提升 > 20%。針對(duì)不同類型的糖蛋白糖基化分析特點(diǎn)，專用的色譜柱確?？焖?、穩(wěn)定和可重現(xiàn)的色譜分離結(jié)果。

AJS 離子源幫助更好的聚焦離子，提高離子化效率，從而提高質(zhì)譜檢測(cè)的靈敏度。雙通道 ADC 檢測(cè)器保證了質(zhì)譜測(cè)量的質(zhì)量數(shù)和質(zhì)譜響應(yīng)的準(zhǔn)確度。

專用 Fragile Swarm Tune 模式，只需勾選糖譜 PCDL 庫和標(biāo)記物類型，即可進(jìn)行糖譜的匹配。

參考文獻(xiàn)：

曹琰，趙雄，王曉娟等.2025 年版《中國藥典》三部增修訂概況[J].中國藥品標(biāo)準(zhǔn),2025,26(1): 28-33. doi: 10.19778/j.chp.2025.01.005