微生態(tài)活菌制品系由人體正常菌群成員或具有促進(jìn)正常菌群生長和活性作用的無害外籍細(xì)菌，經(jīng)培養(yǎng)、收集菌體、干燥成菌粉后，加入適宜輔料混合制成。用于預(yù)防和治療因菌群失調(diào)引起的相關(guān)癥狀和疾病。

微生態(tài)活菌制品必須由非致病的活菌組成，無論在生產(chǎn)過程、制品貯存和使用期間均應(yīng)保持穩(wěn)定的活菌狀態(tài)。它可由一株、多株或幾種細(xì)菌制成單價或多價聯(lián)合制劑。根據(jù)其不同的使用途徑和方法可制備成片劑、膠囊劑、顆粒劑或散劑等多種劑型。

一、基本要求

微生態(tài)活菌制品的制備方法、工藝應(yīng)能保證成品含有足夠的活菌數(shù)量，保持其穩(wěn)定性，同時應(yīng)防止外源因子的污染。

生產(chǎn)和檢定用設(shè)施、原材料及輔料、水、器具、動物等應(yīng)符合“凡例”的有關(guān)要求。

二、制造

（一）生產(chǎn)用菌種

生產(chǎn)用菌種應(yīng)符合“生物制品生產(chǎn)檢定用菌毒種管理規(guī)定”的有關(guān)規(guī)定。

1、名稱及來源

選用的生產(chǎn)用菌種應(yīng)來自人體內(nèi)正常菌群，或?qū)θ梭w無毒無害、具有促進(jìn)正常菌群生長和活性作用的外籍細(xì)菌。細(xì)菌的分離過程和傳代背景應(yīng)清晰，應(yīng)具備穩(wěn)定的生物學(xué)和遺傳學(xué)特性，并能保持穩(wěn)定的活菌狀態(tài)，經(jīng)實(shí)驗(yàn)室和臨床試驗(yàn)證明安全、有效。

2、種子批的建立

菌種的屬、種型分類鑒定，應(yīng)依據(jù)版伯杰氏細(xì)菌系統(tǒng)鑒定手冊（Bergry’s Manual of Systematic Bacteriology）和伯杰氏細(xì)菌命名手冊（Bergry’s Manual of Determinative Bacteriology）的有關(guān)規(guī)定進(jìn)行，包括形態(tài)、生長代謝特性檢查。原始種子或主種子還應(yīng)做遺傳特性和抗生素敏感性等檢查。

三級種子批常規(guī)檢查包括以下3項(xiàng)：

（1）培養(yǎng)特性及染色鏡檢    

將菌種接種于適宜培養(yǎng)基，置有氧或厭氧環(huán)境中培養(yǎng)，觀察其生長情況，確定菌種為需氧性細(xì)菌或厭氧性細(xì)菌；以劃線法觀察在瓊脂平皿上生長的單個菌落的形狀、大小、表面、邊緣、透明度、色澤等特征；也可觀察菌種在不同溫度、pH或不同濃度的氯化鈉溶液等條件下的生長特性等。

取菌種的新鮮培養(yǎng)物涂片做革蘭氏染色，在顯微鏡下觀察菌體的染色反應(yīng)、形態(tài)、大小和排列等，有芽孢的細(xì)菌應(yīng)同時觀察芽孢的形狀、大小和位置（也可增做芽孢染色）。檢查結(jié)果均應(yīng)符合原始菌種的特性。

（2）生化反應(yīng)    

按附錄ⅪⅤ“細(xì)菌生化反應(yīng)培養(yǎng)基”選擇相應(yīng)的培養(yǎng)基或其他適宜的方法進(jìn)行，結(jié)果應(yīng)符合原始菌種的特性。

（3）毒性試驗(yàn)    

毒性試驗(yàn)是通過動物試驗(yàn)檢查菌種是否存在不安全因素，以保證人體使用安全。

用體重18～22g小鼠5只，每只腹腔注射0.3ml新鮮菌液（不少于1.0×109CFU/0.3ml）,連續(xù)觀察3天，小鼠均應(yīng)健康存活、體重增加；或每只小鼠經(jīng)口灌胃0.5ml新鮮菌液（不少于1.0×109CFU/0.5ml），每天1次，連續(xù)3天，從第1天灌胃起連續(xù)觀察至第7天，小鼠均應(yīng)健康存活、體重增加。

除另有規(guī)定外，原始種子或主種子批還需進(jìn)行以下檢查：

（1）細(xì)菌代謝產(chǎn)物——脂肪酸測定    

照氣相色譜法（附錄Ⅲ Ｃ）或其他適宜的方法進(jìn)行，應(yīng)符合該菌種的特性。

（2）遺傳特性分析    

可采用細(xì)菌DNA的G+Cmol%的含量測定或其他適宜方法進(jìn)行，應(yīng)符合該菌種的遺傳特性。

（3）抗生素敏感性試驗(yàn)   

采用瓊脂擴(kuò)散紙片法或其他適宜方法進(jìn)行菌株的抗生素敏感性檢查，應(yīng)符合該菌種的特性。

（4）穩(wěn)定性試驗(yàn)    

菌種在適宜培養(yǎng)基中，連續(xù)傳代30代次后，將第30代培養(yǎng)物作種子批檢定，全部檢查結(jié)果應(yīng)與原始菌種的特性一致。

4、種子批的保存

原始種子和主種子應(yīng)凍干保存于8℃以下，工作種子應(yīng)置于適宜溫度保存。

（二）菌粉制造

應(yīng)包括種子液制備、大罐培養(yǎng)、收獲菌體（或芽孢）和菌體干燥制成菌粉。如生產(chǎn)多價制品時，應(yīng)每種菌分別培養(yǎng)，制備單價菌粉。

1、生產(chǎn)用種子

啟開工作種子批菌種，接種于適宜培養(yǎng)基進(jìn)行多級種子擴(kuò)增，應(yīng)涂片做革蘭氏染色，在顯微鏡下觀察5～10個視野，細(xì)菌的染色反應(yīng)、形態(tài)應(yīng)一致并符合原始菌種的特征。制備過程應(yīng)防止污染，菌種傳代次數(shù)應(yīng)符合規(guī)定。

2、生產(chǎn)用培養(yǎng)基

采用經(jīng)批準(zhǔn)的培養(yǎng)基用于生產(chǎn)。

3、培養(yǎng)

采用液體培養(yǎng)。將種子液置適宜條件下培養(yǎng)（包括厭氧或需氧、溫度、時間等），培養(yǎng)過程中取樣涂片做革蘭氏染色鏡檢、pH值檢測等，芽孢菌需進(jìn)行芽孢形成率的檢測，均應(yīng)符合規(guī)定。培養(yǎng)結(jié)束后取樣做純菌檢查，如發(fā)現(xiàn)污染應(yīng)予廢棄。

生產(chǎn)多價制品的單價菌粉時，應(yīng)分別培養(yǎng)。

4、收獲菌體和制成菌粉

培養(yǎng)結(jié)束后離心收獲濕菌體，與適宜的分散劑、穩(wěn)定劑混合。采用真空冷凍干燥法干燥菌體，芽孢菌可采用加熱干燥方法，再經(jīng)粉碎、過篩制成粉末狀菌粉。

5、菌粉的保存及有效期

應(yīng)通過活菌穩(wěn)定性試驗(yàn)確定保存溫度和有效期。

6、菌粉檢定

按“菌粉檢定”項(xiàng)進(jìn)行，符合規(guī)定后方可進(jìn)行半成品配制。

（三）半成品

1、配制

同一工作種子批菌種生產(chǎn)的最多2批單價菌粉可按批準(zhǔn)的比例與輔料混合均勻后制成半成品。配制多價制品時，應(yīng)將各單價菌粉、輔料按配方比例和配制程序混合均勻，配制過程應(yīng)防止污染。

2、半成品檢定

按“半成品檢定”項(xiàng)進(jìn)行，應(yīng)符合規(guī)定。

（四）成品

1、劑型制備

根據(jù)制品的用途、使用對象和用藥途徑等因素確定劑型。制備過程應(yīng)符合附錄Ⅰ“制劑通則”項(xiàng)下相關(guān)劑型的規(guī)定。

2、分批

成品批號應(yīng)在半成品配制后確定，配制日期即為生產(chǎn)日期。同一批號的制品，應(yīng)來源一致、質(zhì)量均一，按規(guī)定要求抽樣檢驗(yàn)后，能對整批制品作出評定。應(yīng)根據(jù)驗(yàn)證結(jié)果，規(guī)定半成品的分裝時間，如超過24小時，應(yīng)分為不同的亞批。

3、分裝、規(guī)格和包裝

制品的分裝應(yīng)符合附錄Ⅰ“制劑通則”的有關(guān)規(guī)定。包裝應(yīng)符合“生物制品包裝規(guī)程”的有關(guān)規(guī)定。規(guī)格應(yīng)符合批準(zhǔn)的規(guī)格要求。

三、檢定

微生態(tài)活菌制品質(zhì)量檢定應(yīng)包括菌粉檢定、半成品檢定和成品檢定。

（一）菌粉檢定

1、外觀

應(yīng)為白色、灰白色或灰黃色粉末。

2、目的菌檢查

取少量菌粉加入適量，滅菌生理氯化鈉溶液或其他適宜稀釋液后，涂布在適宜瓊脂平皿上，在適宜條件下培養(yǎng)，其培養(yǎng)物的生長特性和染色鏡檢的特征應(yīng)符合生產(chǎn)用菌種特征。

3、雜菌檢查

方法和結(jié)果判斷見本總論附錄3。如不符合規(guī)定應(yīng)廢棄。

4、干燥失重

菌粉中殘余水分的含量會直接影響活菌的生存，須進(jìn)行菌粉干燥失重的檢查。應(yīng)按附錄Ⅶ Ｌ或儀器方法測定。

5、活菌數(shù)測定

測定每克菌粉中含有的活菌數(shù)量。方法見本總論附錄2。

（二）半成品檢定

半成品須做雜菌檢查，根據(jù)用藥途徑確定雜菌檢查的質(zhì)控指標(biāo)。方法和結(jié)果判斷見本總論附錄3。

（三）成品檢定

1、鑒別試驗(yàn)

檢查成品中所含的目的菌是否符合生產(chǎn)用菌種的特性。即按上述“種子批的檢定”方法進(jìn)行生長特性、染色鏡檢和生化反應(yīng)檢查，應(yīng)符合規(guī)定。對于多價制品，則須逐一檢查單價菌特性。

2、理化檢查

（1）外觀  

根據(jù)劑型，觀察制品的外觀、色澤。

片劑外觀應(yīng)完整、光潔，呈白色或類白色，間有菌粉色斑；顆粒劑、散劑和膠囊劑內(nèi)粉末的粒子大小、色澤應(yīng)均勻，間有菌粉色斑。

（2）干燥失重  

按附錄Ⅶ Ｌ或儀器方法測定，減失重量應(yīng)不得超過5.0%，芽孢菌制品應(yīng)不得超過7.0%。

（3）粒度  

散劑和顆粒劑應(yīng)進(jìn)行粒度檢查。

按附錄ⅤＧ第二法，采用單篩分法或雙篩分法檢查，應(yīng)符合規(guī)定。

（4）裝量（重量）差異  

各劑型按附錄Ⅰ“制劑通則”的相應(yīng)規(guī)定進(jìn)行，應(yīng)符合規(guī)定。

（5）崩解時限  

膠囊劑、片劑按附錄ⅤＣ進(jìn)行，應(yīng)符合規(guī)定。

3、活菌數(shù)測定

按本總論附錄2方法測定每克制品中的活菌數(shù)，應(yīng)符合規(guī)定。多價制品應(yīng)分別測定各單價活菌數(shù)。

4、雜菌檢查

目的是檢查成品中外源微生物的污染情況，以保證人體使用安全。

方法和結(jié)果判斷與半成品的“雜菌檢查”項(xiàng)相同。

5、安全試驗(yàn)

安全試驗(yàn)是通過動物試驗(yàn)進(jìn)行的非特異性毒性檢查，應(yīng)根據(jù)制品的使用途徑和人用劑量確定試驗(yàn)方法。

（1）腸道微生態(tài)活菌制品檢查  稱取2g制品，加入8ml生理氯化鈉溶液中，混合均勻。用5只體重18～22g小鼠，每只小鼠經(jīng)口灌胃0.5ml，每天1次，連續(xù)3天。自第1天灌胃起，連續(xù)觀察7天，小鼠應(yīng)健康存活、體重增加，判為合格。如不合格，可另選10只小鼠復(fù)試1次，判定標(biāo)準(zhǔn)同前。

（2）陰道微生態(tài)活菌制品檢查  用24～26g雌性小鼠5只，，每只小鼠陰道內(nèi)置入10mg制品，每天1次，連續(xù)3天。自給藥天起，連續(xù)觀察7天，小鼠應(yīng)健康存活、體重增加，陰道局部無紅腫、分泌物等癥狀，判為合格。

四、保存、運(yùn)輸及有效期

按批準(zhǔn)的溫度保存和運(yùn)輸。自生產(chǎn)之日起，按批準(zhǔn)的有效期執(zhí)行。

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