手機(jī)版
化工儀器網(wǎng)手機(jī)版
化工儀器網(wǎng)小程序
官方微信
公眾號(hào)：chem17
掃碼關(guān)注視頻號(hào)
一、流式細(xì)胞儀技術(shù)原理
流式細(xì)胞儀是一種能夠分離、鑒定和計(jì)數(shù)以單細(xì)胞液體流形式穿過激光束的細(xì)胞的高科技設(shè)備。其工作原理主要基于以下幾個(gè)關(guān)鍵點(diǎn)：
流體動(dòng)力學(xué)聚焦原理：
細(xì)胞樣本需制成單細(xì)胞懸液。
在流式細(xì)胞儀的流動(dòng)室中，細(xì)胞被鞘液包圍，通過精確控制鞘液和樣本流的流速與壓力，使細(xì)胞在鞘液裹挾下呈單列依次通過檢測區(qū)域。這樣確保每個(gè)細(xì)胞能被單獨(dú)檢測，避免細(xì)胞之間的干擾。
激光激發(fā)原理：
當(dāng)細(xì)胞逐個(gè)通過檢測區(qū)時(shí)，激光束照射細(xì)胞。
若細(xì)胞中的成分被熒光染料標(biāo)記，就會(huì)吸收激光能量。不同熒光染料因化學(xué)結(jié)構(gòu)差異，有不同激發(fā)和發(fā)射波長。特定染料與細(xì)胞內(nèi)核酸結(jié)合后，在激光照射下會(huì)產(chǎn)生熒光。
熒光檢測原理：
被激發(fā)的熒光信號(hào)由光學(xué)系統(tǒng)收集，其中濾光片可篩選特定波長熒光。
光電探測器將熒光信號(hào)轉(zhuǎn)變成電信號(hào)，電信號(hào)強(qiáng)度與熒光強(qiáng)度成正比。
通過分析電信號(hào)，可獲取細(xì)胞大小(依據(jù)前向散射光，細(xì)胞越大，前向散射光越強(qiáng))、內(nèi)部復(fù)雜程度(依據(jù)側(cè)向散射光)以及熒光標(biāo)記所代表的生物學(xué)特性(如細(xì)胞表面抗原表達(dá)、細(xì)胞內(nèi)蛋白含量、DNA含量等)等信息。
二、流式細(xì)胞儀操作流程
流式細(xì)胞儀的操作流程包括樣本制備、儀器校準(zhǔn)、樣本檢測、數(shù)據(jù)分析等步驟，具體如下：
樣本制備：
獲取細(xì)胞樣本，并根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康倪x合適熒光染料染色細(xì)胞。血液樣本需抗凝處理，可用EDTA抗凝管并稀釋或用密度梯度離心分離特定細(xì)胞群。組織樣本則要機(jī)械破碎或酶消化成單細(xì)胞懸液。
注意染色的溫度和時(shí)間條件，特定抗體染色需在合適溫度下孵育一定時(shí)間。
儀器校準(zhǔn)：
在檢測前，要調(diào)節(jié)激光功率、校準(zhǔn)光路，確保激光準(zhǔn)確照射檢測區(qū)域。
設(shè)置光電倍增管電壓以優(yōu)化熒光信號(hào)檢測范圍。
設(shè)置閾值以排除細(xì)胞碎片等干擾，根據(jù)細(xì)胞大小設(shè)前向散射光閾值，小于一定大小的顆粒信號(hào)被排除。
樣本檢測：
將制備好的樣本放于流式細(xì)胞儀樣本架，啟動(dòng)程序。
細(xì)胞在流體動(dòng)力學(xué)聚焦下通過檢測區(qū)，產(chǎn)生的熒光和散射光信號(hào)被檢測收集。檢測中可在顯示屏實(shí)時(shí)觀察信號(hào)變化。
數(shù)據(jù)分析：
檢測完成后，用專門軟件處理數(shù)據(jù)。
可根據(jù)熒光信號(hào)強(qiáng)度和分布對細(xì)胞分類計(jì)數(shù)，如繪制熒光強(qiáng)度直方圖顯示不同強(qiáng)度細(xì)胞比例。
也可進(jìn)行雙參數(shù)或多參數(shù)分析，如用散點(diǎn)圖展示兩種抗原表達(dá)水平的細(xì)胞分布。
三、注意事項(xiàng)與維護(hù)保養(yǎng)
注意事項(xiàng)：
樣本制備時(shí)需確保細(xì)胞懸液的均勻性和分散性，避免細(xì)胞團(tuán)聚或沉淀。
儀器校準(zhǔn)需定期進(jìn)行，以確保檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性。
在檢測過程中，需注意觀察信號(hào)變化，及時(shí)發(fā)現(xiàn)并處理異常情況。
維護(hù)保養(yǎng)：
定期清潔流式細(xì)胞儀的流動(dòng)室、激光器等部件，避免污染和堵塞。
定期檢查并更換濾光片、光電倍增管等易損件，確保儀器性能良好。
定期對儀器進(jìn)行校準(zhǔn)和驗(yàn)證，確保檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。
綜上所述，流式細(xì)胞儀是一種基于流體動(dòng)力學(xué)聚焦、激光激發(fā)和熒光檢測原理的高科技設(shè)備。其操作流程包括樣本制備、儀器校準(zhǔn)、樣本檢測和數(shù)據(jù)分析等步驟。在使用過程中，需注意樣本制備的均勻性和分散性、儀器校準(zhǔn)的準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性以及檢測過程中的信號(hào)變化。同時(shí)，還需定期對儀器進(jìn)行維護(hù)保養(yǎng)，以確保其性能良好和檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。
相關(guān)產(chǎn)品
免責(zé)聲明
- 凡本網(wǎng)注明“來源：化工儀器網(wǎng)”的所有作品，均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡(luò)有限公司-化工儀器網(wǎng)合法擁有版權(quán)或有權(quán)使用的作品，未經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)不得轉(zhuǎn)載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)使用作品的，應(yīng)在授權(quán)范圍內(nèi)使用，并注明“來源：化工儀器網(wǎng)”。違反上述聲明者，本網(wǎng)將追究其相關(guān)法律責(zé)任。
- 本網(wǎng)轉(zhuǎn)載并注明自其他來源（非化工儀器網(wǎng)）的作品，目的在于傳遞更多信息，并不代表本網(wǎng)贊同其觀點(diǎn)和對其真實(shí)性負(fù)責(zé)，不承擔(dān)此類作品侵權(quán)行為的直接責(zé)任及連帶責(zé)任。其他媒體、網(wǎng)站或個(gè)人從本網(wǎng)轉(zhuǎn)載時(shí)，必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來源，并自負(fù)版權(quán)等法律責(zé)任。
- 如涉及作品內(nèi)容、版權(quán)等問題，請?jiān)谧髌钒l(fā)表之日起一周內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系，否則視為放棄相關(guān)權(quán)利。
采購中心