厭氧培養(yǎng)箱菌種置入操作流程及培養(yǎng)方法

?一、菌種置入操作流程?

?準備工作?

檢查取樣室內門是否關緊，確保操作室與外界隔絕?。

清潔取樣室及操作手套，避免污染；確認鈀催化劑和干燥劑活性（若失效需更換或再生）?。

?菌種傳遞?

打開取樣室外門，將菌種放入取樣室后立即關閉外門?。

?氣體置換流程?：

?抽真空?：啟動真空泵，抽真空至壓力≥66kPa（500mmHg），停止后關閉真空閥?。

?充氮氣?：打開氮氣閥向取樣室充入氮氣至壓力恢復常壓，重復抽真空-充氮氣操作3次，置換殘留氧氣?。

?混合氣體補充?：最后一次充氣時改用混合氣體（N? 85%、H? 10%、CO? 5%），流量控制在10ml/min?。

?環(huán)境驗證?

使用美蘭指示劑檢測氧濃度：若指示劑保持無色，表明操作室內氧濃度≤1ppm，達到厭氧標準?。

?二、培養(yǎng)方法及環(huán)境維持?

?參數(shù)設置?

設置恒溫培養(yǎng)溫度（常規(guī)35–37℃），控溫精度需達±0.3℃?。

啟動鈀催化劑和除氧裝置，持續(xù)吸附微量氧氣并維持濕度<10%?。

?培養(yǎng)操作?

通過手套操作孔進行菌種接種，避免手套破損導致氧氣滲入?。

將接種后的培養(yǎng)基平皿或試管置于操作室內的恒溫區(qū)域，確保風道暢通以保持溫度均勻?。

?長期培養(yǎng)維護?

?氣體補充?：每日向操作室持續(xù)通入微量混合氣體（10ml/min），通過鈀催化反應消耗殘留氧氣?。

?環(huán)境監(jiān)測?：每日檢查美蘭指示劑顏色變化，若變藍需重新置換氣體?。

?耗材更換?：每周再生鈀催化劑（160℃烘烤2小時），每1–2年更換一次；干燥劑和活性炭每1–2周更換?。

?三、關鍵注意事項?

?安全操作?

混合氣體含氫氣，操作時遠離火源并確保設備接地良好?。

傳遞菌種時嚴格遵循“抽真空-充氮氣”流程，避免氧氣殘留?。

?設備維護?

定期校準溫度傳感器和氧濃度檢測儀，防止數(shù)據(jù)偏差?13。

停止使用時，運行40℃以上烘干程序2小時并開門通風，防止箱內冷凝水積聚?。

?異常處理?

若氧濃度異常升高，立即暫停實驗，排查氣路泄漏或催化劑失效問題