茶多酚(TP)檢測試劑盒(酒石酸鐵比色法)
產(chǎn)品貨號(hào): BA1569
產(chǎn)品規(guī)格: 50T
產(chǎn)品簡介:
茶多酚(Tea?Polyphenols,TP)是茶葉中多酚類物質(zhì)的總稱,包括黃烷醇類、花色苷類、黃酮類、黃酮醇類和酚酸類等,是一類兒茶素為主體的黃酮化合物,兒茶素占60~80%,具有C6-C3-C6碳骨架結(jié)構(gòu),是一種重要的天然抗氧化物質(zhì),能夠清除自由基。類物質(zhì)茶多酚又稱茶鞣或茶單寧。
茶多酚(TP)檢測試劑盒(酒石酸鐵比色法)檢測原理是以酒石酸鐵為底物,利用茶多酚與酒石酸鐵反應(yīng),生成穩(wěn)定化合物,以分光光度計(jì)540nm處測定吸光度,在一定范圍內(nèi)吸光度與顏色深淺的變化成正比,與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較,進(jìn)而計(jì)算茶多酚含量。該試劑盒主要用于測定植物組織、血清等樣品中茶多酚含量,尤其適用于測定茶葉中茶多酚含量。該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域,不宜用于臨床診斷或其他用途。
產(chǎn)品組成:
產(chǎn)品名稱 | 50T | 保存條件 |
試劑(A): 茶多酚標(biāo)準(zhǔn)(1mg/ml) | 1ml | 4℃,避光 |
試劑(B): TP Assay bufffer | 500ml | 4℃ |
試劑(C):TP顯色液 | 25ml | 4℃,避光 |
自備材料:
1. 蒸餾水
2. 研缽
3. 離心管或試管
4. 離心機(jī)
5. 比色杯
6. 分光光度計(jì)
操作步驟(僅供參考):
1. 配制茶多酚標(biāo)準(zhǔn):取干凈離心管或試管和茶多酚標(biāo)準(zhǔn)(1mg/ml),按下表進(jìn)行操作,依次稀釋。
加入物(ml) | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
茶多酚標(biāo)準(zhǔn)(1mg/ml) | 0.01 | 0.02 | 0.03 | 0.04 | 0.05 |
TP Assay buffer | 0.49 | 0.48 | 0.47 | 0.46 | 0.45 |
相對(duì)于茶多酚含量(μg/ml) | 20 | 40 | 60 | 80 | 100 |
2. 準(zhǔn)備樣品:?
①植物樣品:取植物組織,研磨成粉末。煮沸?TP?Assay?buffer,將0.2g粉末加入TP?Assay?buffer中,沸水浴,用200目細(xì)胞篩或?yàn)V紙過濾。濾渣再繼續(xù)置于新的煮沸4.5ml?TP?Assay?buffer中,沸水浴,用200目細(xì)胞篩或?yàn)V紙過濾,合并兩次濾液。5000g離心,取上清液,即為茶多酚提取液。4℃避光保存,用于茶多酚的檢測。?
②血漿、血清和尿液樣品:血漿、血清按照常規(guī)方法制備后可以直接用于本試劑盒的測定,4℃避光保存,用于茶多酚的檢測。?
③細(xì)胞或組織樣品:取恰當(dāng)細(xì)胞或組織裂解液,如有必要用TP?Assay?buffer進(jìn)行適當(dāng)勻漿,5000g離心15min,取上清液,即為茶多酚提取液。4℃避光保存,用于茶多酚的檢測。
④高濃度樣品:如果樣品中含有較濃度的茶多酚,可以使用TP?Assay?buffer進(jìn)行恰當(dāng)?shù)南♂尅?
3. TP加樣:按照下表設(shè)置空白管、對(duì)照管、測定管,溶液應(yīng)按照順序依次加入,并注意避免產(chǎn)生氣泡。如果樣品中的TP濃度過高,可以減少樣品用量或適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行測定。樣品的檢測最好能設(shè)置2平行管,求平均值。
加入物(ml) | 空白管 | 標(biāo)準(zhǔn)管 | 測定管 |
TP Assay buffer | 2 | 1.5 | 1.5 |
茶多酚標(biāo)準(zhǔn)(1-5號(hào)) | - | 0.5 | - |
待測樣品 | - | - | 0.5 |
TP顯色液 | 0.5 | 0.5 | 0.5 |
4. TP測定:比色杯光徑1.0cm,以空白調(diào)零,以分光光度計(jì)測定540nm處標(biāo)準(zhǔn)管、測定管的吸光度。
計(jì)算:
以系列茶多酚標(biāo)準(zhǔn)濃度(1-5號(hào))(20、40、60、80、100μg/ml)為橫坐標(biāo),以對(duì)應(yīng)的吸光度為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,求得回歸方程。以測定管吸光度代入回歸方程求得提取液中TP含量。
組織樣本TP含量(μg/g)=(C×VT)/(W×VS)
液體樣本TP含量(μg/ml)=(C×VT)/VS
VS=測定時(shí)所用提取液的體積(ml)
注意事項(xiàng):
1. 提取茶多酚時(shí),注意提前煮沸TP?Assay?buffer,以便充分提取。?
2. 如果沒有分光光度計(jì),也可以使用普通的酶標(biāo)儀測定。?
3. 每次檢測指標(biāo)不宜過多,否則操作時(shí)間不一,有可能導(dǎo)致樣本間的差異。
有效期:6個(gè)月有效。
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