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影響ELISA檢測試劑盒實(shí)驗(yàn)結(jié)果的干擾物質(zhì)有哪些?

來源:上海撫生實(shí)業(yè)有限公司   2025年02月14日 11:16  

       血清是常用的ELISA檢測試劑盒實(shí)驗(yàn)標(biāo)本,血漿一般可視為與血清同等的標(biāo)本,標(biāo)本引起的假陽性和假陰性結(jié)果主要是干擾性物質(zhì)所致,分為內(nèi)源性物質(zhì)和外源性物質(zhì)兩種。


一、內(nèi)源性物質(zhì)
有人認(rèn)為大約40%的人血清標(biāo)本中含有非特異性干擾物質(zhì),可以不同程度影響檢測結(jié)果。常見的干擾物質(zhì)有:類風(fēng)濕因子、補(bǔ)體、嗜異 性抗體、嗜靶抗原自身抗體、醫(yī)源性誘導(dǎo)的抗鼠Ig ( s )抗體、交叉反應(yīng)物質(zhì)和其它物質(zhì)等。
1、類風(fēng)濕因子
人血清中IgM、IgG型類風(fēng)濕因子(RF)可以與ELISA系統(tǒng)中的捕捉抗體及酶標(biāo)記二抗的FC段直接結(jié)合,從而導(dǎo)致假陽性。解決該情況的辦法是:

①用F(ab)2替代完整的IgG;

②標(biāo)本用聯(lián)有熱變性(63℃,10 minIgG的固相吸附劑處理(將熱變性IgG加入到標(biāo)本稀釋液中同樣有效);

③檢測抗原時(shí),可以用2-  C2H6OS等加入到標(biāo)本 稀釋液中,使RF降解。
2、補(bǔ)體
ELISA系統(tǒng)中固相一抗和標(biāo)記二抗過程中,抗體分子發(fā)生變構(gòu),其FC段的補(bǔ)體C1q分子結(jié)合位點(diǎn)被暴露出來,使C1q 可以將二者連接起來,從而造成假陽性。解決的辦法是:①用EDTA稀釋標(biāo)本;②用53℃,10 min56℃,30 min加熱血清使C1q滅活。
3、嗜異性抗體
人類血清中含有能與嚙齒類動物(如鼠等)Ig ( s ) 結(jié)合的天然嗜異性抗體,可將ELISA系統(tǒng)中一抗和二抗連接起來,也能造成假陽性。解決的辦法是:可在標(biāo)本稀釋液中加入過量的動 物Ig ( s ) ,但加入量不足或亞類不同時(shí)無效。
4、嗜靶抗原的自身抗體
抗甲狀腺球蛋白、抗胰島素等嗜靶抗原的自身抗體,有時(shí)能與靶抗原結(jié)合形成復(fù)合物,在ELISA方法中均可干擾抗原抗體測定結(jié)果。為避免以上情況出現(xiàn),解決的辦法是:測定前需用理化方法將其解離后再測定。
5、醫(yī)源性誘導(dǎo)的抗鼠Ig ( s )抗體
臨床開展的用鼠源性CD3等單克隆抗體治療,用放射性同位素標(biāo)記鼠源性抗體的影像診斷及靶向治療等新技術(shù),均有可能使這些病人體 內(nèi)產(chǎn)生抗鼠抗體;另外,被鼠等嚙齒類動物咬傷的病人體內(nèi)也可以產(chǎn)生抗鼠Ig ( s )抗體。這些病人ELISA測定時(shí)均可產(chǎn)生假陽性。解決的辦法是:測定抗原時(shí),在標(biāo)本中加入足量的正常鼠Ig ( s ) ,從而克服由于上述原因造成的假陽性。
6、交叉反應(yīng)物質(zhì)
類de高辛、類AFP樣物質(zhì)等,是與靶抗原有交叉反應(yīng)的物質(zhì)。在用多抗測定抗原時(shí)對測定結(jié)果影響不大,但在用單克隆抗體測定抗原時(shí) ,假如交叉抗原決定簇正好是所用單克隆抗體相對應(yīng)的靶決定簇時(shí),也會出現(xiàn)假陽性結(jié)果。
7、標(biāo)本中其它成分的影響
血清脂質(zhì)過高、膽紅素、血紅蛋白及粘度過大等,均對ELISA測定結(jié)果有干擾作用。
二、外源性物質(zhì)
外源性物質(zhì)經(jīng)常是由于用于ELISA測定的血標(biāo)本的采集、貯存等不當(dāng)所致。如標(biāo)本溶血、標(biāo)本被污染、標(biāo)本貯存過久、標(biāo)本凝集 不全和采血管中添加物等影響。
1、標(biāo)本溶血
由于各種人為原因引起的標(biāo)本溶血,均可因紅細(xì)胞破壞溶解時(shí)釋放出大量具有過氧化物酶活性的血紅蛋白,在以辣根過氧化物酶為標(biāo)記的 ELISA測定中,會導(dǎo)致非特異性顯色,干擾測定結(jié)果。為克服上述干擾作用,標(biāo)本采集時(shí)必須注重避免溶血。
2、標(biāo)本受細(xì)菌污染
因菌體中可能含有內(nèi)源性辣根過氧化物酶,因此,被細(xì)菌污染的標(biāo)本同溶血標(biāo)本一樣,亦可產(chǎn)生非特異性顯色而干擾測定結(jié)果。
3、標(biāo)本保存不當(dāng)
在冰箱中保存過久的標(biāo)本,血清中IgG可聚合成多聚體、AFP可形成二聚體,在間接法ELISA測定中會導(dǎo)致本底過深、甚至造成 假陽性;標(biāo)本放置時(shí)間過長(如一天以上),有時(shí)抗原或抗體免疫活性減弱,亦可出現(xiàn)假陰性。為克服上述干擾,ELISA測定的血清 標(biāo)本宜為新鮮采集;如不能立即測定,5天內(nèi)測定的血清標(biāo)本可存放于4℃,1周后測定的血清標(biāo)本應(yīng)低溫凍存;凍存后融解的標(biāo)本,蛋白質(zhì)局部濃縮,分布不均,應(yīng)充分混合后再測定,但混勻時(shí)應(yīng)輕柔,不可強(qiáng)烈振蕩。
4、標(biāo)本凝集不全
在沒有促凝劑和抗凝劑存在的情況下,正常血液采集后1/2~2h開始凝固,18~24h全凝固。臨床檢驗(yàn)工作中,有時(shí)為了爭取 時(shí)間快速檢測,常在血液還未開始凝固時(shí)即強(qiáng)行離心分離血清,此時(shí)的血清中仍殘留部分纖維蛋白原,在ELISA測定過程中可以形成 肉眼可見的纖維蛋白塊,易造成假陽性結(jié)果;這類情況于次日復(fù)查時(shí)因血凝已全,血清中不再有纖維蛋白原存在,故復(fù)查結(jié)果變?yōu)殛幮?。為避免上述干擾作用,解決的辦法最好是血液標(biāo)本采集后必須使其充分凝固后再分離血清,或標(biāo)本采集時(shí)用帶分離膠的采血管或于采血 管中加入適當(dāng)?shù)拇倌齽?/span>
5、標(biāo)本管中添加物質(zhì)的影響
抗凝劑(如肝素,EDTA)、酶抑制劑(如NaN3可抑制ELISA系統(tǒng)中辣根過氧化物酶活性)及快速分離血清的分離膠等均對ELISA測定有一定干擾作用。
綜上所述,對臨床檢驗(yàn)ELISA測定中出現(xiàn)的假陽性或假陰性結(jié)果,在考慮試劑因素和操作因素之外,更多的應(yīng)從標(biāo)本因素方面進(jìn)行分 析,并應(yīng)采取相應(yīng)措施排除干擾作用,從而為臨床提供正確可靠的檢測結(jié)果。

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