賴氨酸(lysine，Lys)含量測定試劑盒說明書

微量法 100 管/96 樣

正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定測定意義：

賴氨酸是人體必需氨基酸之一，能促進人體發(fā)育、增強免疫功能，并有提高中樞神經組織功能的作用。賴氨酸為堿性必需氨基酸。由于谷物食品中的賴氨酸含量甚低，且在加工過程中易被破壞而缺乏，故稱為第一限制性氨基酸。

測定原理：

蛋白質中的賴氨酸具有一個游離的ε-NH2，它與茚三酮試劑反應生成藍紫色物質，其顏色的深淺在一定范圍內與賴氨酸的含量成線性關系。亮氨酸與賴氨酸的碳原子數(shù)目相同，而且僅有—個游離氨基(ε-NH2)，所以通常用亮氨酸配制標準液。

組成：

自備儀器和用品：

可見分光光度計/酶標儀、臺式離心機、可調式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研缽、冰、蒸餾水、水浴鍋。

賴氨酸提取：

樣本烘干粉碎，稱取約 0.01g 樣本，加入 1ml 提取液，充分勻漿。80℃水浴提取 20min，冷卻后 10000g

離心 10min，取上清待測。

測定步驟：

1、分光光度計或酶標儀預熱 30min 以上，調節(jié)波長至 570nm，蒸餾水調零。

2、工作液的配制：取 10ml 試劑一與 10ml 試劑二混合搖勻，取上清備用。用不完的試劑 4℃保存。

3、在有蓋EP 管中加入下列試劑：

混勻，80℃水浴 30min（蓋緊，以防止水分散失），冷卻至常溫。

混勻，取 200μl 至微量石英比色皿或 96 孔板中，于 530nm 波長處記錄吸光值A。△A=A 測定管-A 空白管?？瞻坠苤灰鲆还?。

賴氨酸含量計算：

a.  用微量石英比色皿測定的計算公式如下

標準條件下測定回歸方程為 y = 0.0062x - 0.0212；x 為賴氨酸含量（µg/ml），y 為吸光值。

1.  按照蛋白濃度計算

賴氨酸含量(µg/mg prot)=[(△A +0.0212)÷0.0062×V1]÷(Cpr ×V1)×1.1515

=185.73×(△A+0.0212) ÷Cpr

2.  按照樣本質量計算

賴氨酸含量(µg/g 干重)=[(△A +0.0212)÷0.0062×V1]÷(W ×V1÷V2)×1.1515

=185.73×(△A+0.0212) ÷W

V1：加入反應體系中樣本體積，0.1ml；V2：加入提取液體積，1 ml；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/ml； W：樣本質量，g；1.1515，校正系數(shù)。

b.  用 96 孔板測定的計算公式如下

標準條件下測定回歸方程為 y = 0.0031x - 0.0212；x 為賴氨酸含量（µg/ml），y 為吸光值。

1.  按照蛋白濃度計算

賴氨酸含量(µg/mg prot)=[(△A +0.0212)÷0.0031×V1]÷(Cpr ×V1)×1.1515

=371.45×(△A+0.0212) ÷Cpr

2.  按照樣本質量計算

賴氨酸含量(µg/g 干重)= [(△A +0.0212)÷0.0031×V1]÷(W ×V1÷V2)×1.1515

=371.45×(△A+0.0212) ÷W

V1：加入反應體系中樣本體積，0.1ml；V2：加入提取液體積，1 ml；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/ml； W：樣本質量，g；1.1515，校正系數(shù)。