當(dāng)前免疫學(xué)研究多采用免疫健全的小鼠模型，小鼠原代免疫細胞已成為關(guān)鍵工具。 然而，小鼠原代免疫細胞的基因轉(zhuǎn)染一直面臨低效率、高死亡率等技術(shù)難題。 現(xiàn)有的轉(zhuǎn)染方法 （如慢病毒、電轉(zhuǎn)、脂質(zhì)體等） 在這些細胞中效果不佳，特別是在基因編輯等涉及大片段基因遞送的研究中，這一瓶頸尤為明顯。

為突破這一技術(shù)難關(guān)，西湖凝聚體與西湖大學(xué)的研究團隊聯(lián)合開發(fā)了ProteanFect CRISPRMax 小鼠免疫細胞轉(zhuǎn)染試劑盒。該創(chuàng)新系統(tǒng)采用全新核酸遞送策略，成功解決了傳統(tǒng)方法的局限，能夠 高效遞送大片段核酸，實現(xiàn)小鼠原代免疫細胞的高效基因編輯。

在小鼠原代 T 細胞中實現(xiàn)高達 97% 的基因編輯效率

圖1. ProteanFect CRISPRMax實現(xiàn)在小鼠原代T細胞的高效基因編輯

上述結(jié)果來源于陸·軍軍醫(yī)大學(xué)的研究者，研究中使用了 ProteanFect CRISPRMax 小鼠免疫細胞轉(zhuǎn)染試劑盒 （PT06） 。在該實驗中，小鼠原代 T 細胞共轉(zhuǎn)染了 Cas9 mRNA、目的基因 sgRNA 和 EGFP-mRNA （其中EGFP mRNA用于目標(biāo)細胞的篩選） ，成功實現(xiàn)了以下效果：

1、高轉(zhuǎn)染效率：在總細胞中， 79.5% 的細胞實現(xiàn)目的基因敲除 ；而在 EGFP 陽性 T 細胞中， 97% 的細胞實現(xiàn)目的基因敲除 ，基因敲除效·果顯·著。

2、高效共轉(zhuǎn)：可利用篩選標(biāo)簽 （如EGFP、Puro等） 方便地富集成功基因編輯的細胞。

3、低細胞毒性：實驗結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)染后的小鼠T細胞生存率高，且生理功能未受影響。

ProteanFect 何以如此高效？

ProteanFect 創(chuàng)新基因遞送方式

ProteanFect CRISPRMax 采用了一種創(chuàng)新的生物分子凝聚體技術(shù)：ProteanFect 通過將蛋白分子和核酸自組裝成一種規(guī)則的納米顆粒，這些納米顆粒能夠通過細胞的主動內(nèi)吞機制進入細胞內(nèi)部。這些顆粒穩(wěn)定而功能強大，可以保護 mRNA 免于降解并保持其活性。此外，這種設(shè)計無需額外的化學(xué)修飾，從而減少了細胞毒性，顯著提升實驗的安全性。

ProteanFect CRISPRMax Cas9 基因編輯原理

1、通過共轉(zhuǎn)染 Cas9 mRNA 與 sgRNA，成功表達 Cas9 蛋白。

2、Cas9 蛋白與 sgRNA 在細胞內(nèi)自組裝形成 RNP 復(fù)合物。

3、RNP 復(fù)合物進入細胞核并實現(xiàn)高效基因編輯。

圖3. ProteanFect核酸遞送原理示意圖

ProteanFect與傳統(tǒng)技術(shù)的對比

ProteanFect 無需使用病毒載體或電轉(zhuǎn)技術(shù)，避免了病毒可能帶來的免疫反應(yīng)和安全風(fēng)險，也避免了電轉(zhuǎn)對細胞的損傷。ProteanFect 與其他常用轉(zhuǎn)染方法的對比 ：

ProteanFect CRISPRMax Cas9 基因編輯卓·越優(yōu)勢：

高效性能——轉(zhuǎn)染效率可達 70%-95% ，可同時遞送多種核酸，共表達率超 90% ， 適用于人源和小鼠原代免疫細胞 ；

卓·越安全性—— 非病毒、非電轉(zhuǎn)、非脂質(zhì)體設(shè)計，基于內(nèi)源蛋白，生物相容性極·佳，顯著降低細胞損傷；

操作便捷—— 標(biāo)準(zhǔn)化的實驗流程，無需復(fù)雜的預(yù)處理步驟，可重復(fù)性高；

系統(tǒng)靈活——不受細胞數(shù)量限制，從 103 – 108 個細胞都可以轉(zhuǎn)染。

圖4. 使用ProteanFect CRISPRMax Cas9試劑盒在人原代T細胞和小鼠原代T細胞中實現(xiàn)高效基因標(biāo)記，基因編輯效率范圍為 67%-88% 。

ProteanFect 的廣泛應(yīng)用

ProteanFect 不僅在小鼠原代T細胞中表現(xiàn)卓·越，還能應(yīng)用于以下領(lǐng)域：

小鼠原代免疫細胞的基因編輯（NK細胞、γδ T 等免疫細胞），以及人源化小鼠免疫細胞

人原代免疫細胞基因編輯

疾病模型構(gòu)建

高通量的靶點篩選

圖5. 用戶對于ProteanFect的認可

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