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α-淀粉酶測定試劑盒 (Ceralpha Method)原理與使用

來源:上海惠誠生物科技有限公司   2024年12月05日 17:14  

α-Amylase Assay Kit (Ceralpha Method)
α-淀粉酶測定試劑盒
貨號:K-CERA
規(guī)格:100 assays per kit

作品簡介:
微生物α-淀粉酶在谷物制品淀粉改性和谷物加工中有著廣泛的應(yīng)用。谷物及其制品中內(nèi)源性α-淀粉酶的水平對這些商品的工業(yè)化開發(fā)具有重要影響。在制作面包時(shí),α-淀粉酶的含量必須足以產(chǎn)生可被酵母吸收和利用的糖類,但又不能高到導(dǎo)致淀粉過度糊化,從而導(dǎo)致面包屑粘稠和加工過程中的問題。在釀酒行業(yè),麥芽α-淀粉酶水平是麥芽品質(zhì)的重要指標(biāo)。α-淀粉酶還可作為青貯飼料添加劑,幫助淀粉降解,從而為細(xì)菌生長提供可發(fā)酵糖。細(xì)菌、真菌和谷物α-淀粉酶都可以用淀粉酶HR試劑測定,但需要修改測定條件(特別是pH)以適應(yīng)每種特定的酶。淀粉酶HR試劑是α-淀粉酶特異性試劑。該底物對β-淀粉酶、淀粉葡糖苷酶和α-葡糖苷酶等外泌酶具有絕對的抗性。

原則:
用于α-淀粉酶測定的Ceralpha程序(使用淀粉酶HR試劑)采用定義的低聚糖“非還原端阻斷對硝基苯基麥芽糖苷”(BPNPG7)作為底物,存在過量的耐熱性α-葡萄糖苷酶(由于“阻斷基團(tuán)”的存在,它對天然底物沒有作用)。在內(nèi)作用α-淀粉酶水解低聚糖時(shí),混合物中過量的α-葡萄糖苷酶使對硝基苯麥芽糖片段瞬間定量水解為葡萄糖和游離對硝基酚。

從本質(zhì)上講,在規(guī)定的條件下,將谷物面粉提取物或發(fā)酵液的等分物與底物混合物孵育,并通過添加弱堿性溶液終止反應(yīng)(并產(chǎn)生顏色)。測量400 nm處的吸光度(先前的吸光度值是在410 nm處測量的,與文獻(xiàn)值一致,但真正的吸收峰是在400 nm處),這與分析樣品中α-淀粉酶的水平直接相關(guān)。
淀粉酶HR混合試劑可用于谷物、真菌和細(xì)菌α-淀粉酶的定量測定。隨著耐熱性α-葡萄糖苷酶取代淀粉葡萄糖苷酶和酵母α-葡萄糖苷酶(如存在于原始Ceralpha試劑混合物中),該檢測現(xiàn)在可以在更寬的pH范圍(5.2至7.0)和高達(dá)60°C的溫度下使用。使用該試劑,谷物α-淀粉酶活性的最佳pH值為5.2-5.4。在此pH范圍內(nèi),淀粉酶HR試劑對谷物α-淀粉酶的活性值與含淀粉葡萄糖苷酶和α-葡萄糖苷酶的Ceralpha試劑在pH 5.2下的活性值基本相同。以阻斷對硝基苯基麥芽糖苷為底物的試劑混合物不能區(qū)分真菌、谷物和細(xì)菌α-淀粉酶。

準(zhǔn)確性:
標(biāo)準(zhǔn)誤差通常小于5%。

KITS:
Kits suitable for performing 100  assays are available from Megazyme and consist of: 
1. Full assay method
2. Freeze dried BPNPG7 plus thermostable α-glucosidase
3. Concentrated Extraction Buffer
4. Concentrated Stopping Reagent
5. Control Malt Flour

特異性:
該試驗(yàn)對α-淀粉酶具有絕對特異性。

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