新品應(yīng)運(yùn)而生

非特異性核酸酶（以下簡(jiǎn)稱(chēng)“核酸酶”）廣泛應(yīng)用于生物制品生產(chǎn)過(guò)程中的宿主核酸殘留（Host Cell DNA，以下簡(jiǎn)稱(chēng)“HCD”）控制。酶活性是核酸酶的主要性能指標(biāo)，受溫度、鹽濃度和有效鎂離子濃度等多種因素影響。

工藝條件的改變、酶配液和運(yùn)輸過(guò)程會(huì)造成核酸酶活性變化，增加HCD的控制風(fēng)險(xiǎn)和工藝開(kāi)發(fā)難度。酶活性作為核酸酶殘留的監(jiān)測(cè)指標(biāo)已納入《中國(guó)藥典》2025版的新增內(nèi)容討論，核酸酶全生命周期的準(zhǔn)確活性評(píng)價(jià)對(duì)于HCD去除工藝穩(wěn)定性和酶使用成本控制至關(guān)重要。并且過(guò)度添加核酸酶將導(dǎo)致成本和酶殘留風(fēng)險(xiǎn)上升。

基于此，義翹神州開(kāi)發(fā)了高易用性和穩(wěn)定性的核酸酶活性檢測(cè)試劑盒（貨號(hào)：NE001），已成功支撐客戶(hù)藥品在FDA的上市申報(bào)。

表1：核酸酶活性檢測(cè)試劑盒組分

1核酸酶活性檢測(cè)試劑盒適用范圍

核酸酶活性檢測(cè)試劑盒用于其全生命周期的質(zhì)量控制，包括原料入廠(chǎng)質(zhì)控、中間儲(chǔ)存液穩(wěn)定性評(píng)價(jià)、核酸酶去除宿主核酸工藝研究和核酸酶殘留檢測(cè)等。試劑盒可用于傳統(tǒng)非耐鹽核酸酶、耐鹽核酸酶等HCD控制用核酸酶，以及其他具有雙鏈DNA水解活性的非特異性核酸酶，包括但不限于DNase I、Exonuclease I、Exonuclease III、Micrococcal nuclease、S1 nuclease、T5 exonuclease、T7 endonuclease、SuperNuclease、Benzonase®。

2 核酸酶活性檢測(cè)試劑盒優(yōu)勢(shì)

操作像測(cè)蛋白濃度一樣簡(jiǎn)單

國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)定，高重現(xiàn)性

高穩(wěn)定性、高精密度、高靈敏度

核酸酶活直接定量方法，不依賴(lài)酶參考品

2.1操作簡(jiǎn)單，適用性高

傳統(tǒng)核酸酶測(cè)活方法常以天然提取的不溶雙鏈DNA（如鮭魚(yú)精DNA或小牛胸腺DNA）為底物，利用酶水解雙鏈DNA生成單鏈DNA的原理，依據(jù)底物的吸光度變化，定量檢測(cè)核酸酶活性。該方法底物批間一致性和均一性差，測(cè)活方法繁瑣，給核酸酶活性準(zhǔn)確定量帶來(lái)了巨大挑戰(zhàn)。

義翹神州開(kāi)發(fā)的試劑盒采用高靈敏度的雙鏈DNA熒光底物，通過(guò)檢測(cè)核酸酶水解底物釋放的產(chǎn)物熒光信號(hào)檢測(cè)酶活性。操作流程與BCA法或考馬斯亮藍(lán)法測(cè)定蛋白濃度一樣簡(jiǎn)單，只需將待測(cè)樣本經(jīng)稀釋液稀釋后與底物混合孵育5-60分鐘后終止，讀取熒光值，再利用產(chǎn)物熒光標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)線(xiàn)性回歸計(jì)算核酸酶水解產(chǎn)物量，熒光產(chǎn)物量與反應(yīng)時(shí)間的比值即為酶活性。

與傳統(tǒng)測(cè)活相比，數(shù)據(jù)處理不需要使用4-PL擬合或線(xiàn)性區(qū)間截取等繁瑣方法對(duì)酶反應(yīng)速率進(jìn)行擬合計(jì)算。且由于產(chǎn)物熒光信號(hào)穩(wěn)定，熒光酶標(biāo)儀、qPCR儀、熒光微量光度計(jì)或其他熒光定量設(shè)備均可使用本試劑盒進(jìn)行核酸酶定量，產(chǎn)品儀器適用性高。

試劑盒操作示意圖

2.2高穩(wěn)定性、高精密度和高靈敏度

試劑盒產(chǎn)物參考品經(jīng)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)定，使得本方法具有高重現(xiàn)性的優(yōu)勢(shì)。試劑盒方法按照《中國(guó)藥典》要求，完成系統(tǒng)的方法學(xué)驗(yàn)證，驗(yàn)證結(jié)果顯示本試劑盒方法具有高穩(wěn)定性、高精密度和高靈敏度的優(yōu)點(diǎn)。

表2：義翹神州核酸酶活性檢測(cè)試劑盒方法學(xué)驗(yàn)證結(jié)果匯總表

*核酸酶活性含量=產(chǎn)物量/反應(yīng)時(shí)間。

熒光底物法因其高靈敏性已被應(yīng)用到核酸酶殘留檢測(cè)。傳統(tǒng)熒光法核酸酶活性檢測(cè)殘留一般采用DNase I作為酶參考品，由于不同核酸酶在不同測(cè)活條件下的相對(duì)活性不同，因此無(wú)法直接用于其他核酸酶的活性標(biāo)定。核酸酶脫冷或反復(fù)凍融易失活，因此使用過(guò)程中需要對(duì)核酸酶參考品進(jìn)行系統(tǒng)的穩(wěn)定性考察與確認(rèn)，以確保檢測(cè)結(jié)果的可靠性。

與傳統(tǒng)熒光底物法依賴(lài)核酸酶參考品的間接檢測(cè)不同，本試劑盒使用經(jīng)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)定的產(chǎn)物參考品直接測(cè)定核酸酶活，避免了因酶參考品不穩(wěn)定帶來(lái)的檢測(cè)結(jié)果不準(zhǔn)確風(fēng)險(xiǎn)。

表3：核酸酶活性檢測(cè)方法比較表

核酸酶“全生命周期”產(chǎn)品