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如何改善組織學切片中的核染色?

來源:上海牧榮生物科技有限公司   2024年08月15日 15:15  

希望改善組織切片中的細胞核染色?我們可以幫忙!組織學標本通常需要細胞核和組織的其他細胞成分之間的明顯區(qū)別,以給病理學家提供最佳的診斷外觀。蘇木精一種堿性染料,將細胞核染色,使其呈現(xiàn)藍色到紫色。曙紅將粉紅色調添加到細胞質中,將紅色調添加到血細胞中,從而產生對比鮮明的藍紫色和粉紅色陰影,這在標本的細胞結構中是截然不同的。


對于使用組織學標本的常規(guī)診斷,使用蘇木精和伊紅(H&E)染色是目前觀察細胞結構細節(jié)的方法。因為這種染色顯示了如此廣泛的細胞質、細胞核和細胞外基質特征,實驗室技術人員能夠控制嗜堿性染色的外觀和強度,以滿足病理學家的期望。主要有兩種類型:Harris H&E,一種回歸技術,和Gill的H&E,一種漸進技術。這篇文章討論了如何改善每種技術的嗜堿性核染色。

Harris  H&E染色:嗜堿性染色太弱
哈里斯蘇木精是一種回歸染色技術,因此組織切片首先用蘇木精過度染色以產生藍色細胞核,然后在分化步驟中在弱酸酒精中去除多余的染料。

當蘇木精的顏色太弱或標本暴露在蘇木精中的時間不夠長時,H&E染色中的弱嗜堿性核染色就會發(fā)生。以下是我們推薦的解決方案:

  1. 蘇木精中的暴露時間太有限:

    為了解決曝光時間,調整載玻片在蘇木精染色溶液中的時間長度,直到您看到所需的染色強度。
  2. 蘇木精的pH值超出范圍:

    為了解決蘇木精被稀釋超過pH值5-6的理想范圍的問題,在染色過程中盡量減少水分帶入蘇木精溶液。
  3. 水的pH值超出范圍:

    染色前檢查水的pH值,如果可能,用去離子水或蒸餾水代替自來水。這可以解決水中含有太多氯的問題,氯可以作為漂白劑;減弱蘇木精染色。
  4. 弱溶液滲透:

    對于石蠟包埋標本上的H&E染色,如果嗜堿性染色太淺,有可能石蠟沒有從組織切片中溶解出來。如果組織切片中有蠟,水基染色液不能適當滲透標本,導致染色弱。將載玻片放回新鮮二甲苯中,去除切片中的石蠟,然后繼續(xù)對組織標本進行重新染色。
  5. 不良固定或組織處理:

    弱嗜堿性染色的另一個原因是不良的固定或處理。這意味著染色劑不會與組織結合;這是準備紙巾的問題。
  6. 酸性酒精濃度過高:

    如果酸性醇的濃度對于分化步驟來說太強,或者如果樣本在酸性醇中花費了太多時間,這種回歸染色技術可能導致太多的染料被去除。通過選擇較低濃度的酸性酒精溶液(即從1%變?yōu)?.5%溶液)或減少樣品在溶液中的時間來解決這一問題。

Gill’s H&E染色:嗜堿性染色太弱
吉爾蘇木精是一種進行性染色。將染色劑施用于組織切片,而不需要在區(qū)分劑(通常為酸性醇)中進行后續(xù)步驟,以去除過量的嗜堿性染色劑。

  1. 蘇木精中的曝光時間太有限:要解決曝光時間,調整載玻片在蘇木精染色中的時間長度,直到您看到所需的染色強度。
  2. 蘇木精的pH值超出范圍:為了解決蘇木精被稀釋超過pH值5-6的理想范圍的問題,在染色過程中,盡量減少水分帶入蘇木精溶液。
  3. 水的pH值超出范圍:在染色前檢查水的pH值,如果可能,用去離子水或蒸餾水代替自來水。這可以解決水中含有太多氯的問題,氯可以作為漂白劑,可以減弱蘇木精染色。
  4. 弱溶液滲透:對于石蠟包埋標本上的H&E染色,如果嗜堿性染色太淺,有可能石蠟沒有從組織切片中溶解出來。如果組織切片中有蠟,水基染色液不能適當滲透標本,導致染色弱。將載玻片放回新鮮的二甲苯中,去除切片中的石蠟,然后繼續(xù)對組織標本進行重新染色。
  5. 固定或處理不良:弱嗜堿性染色的另一個原因是固定或處理不良。這意味著染色劑不會與組織結合;這是準備紙巾的問題。


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