根據(jù)分離度（Rs）公式，分離度的影響因素主要有柱效（N）、選擇性（α）和保留因子（或稱容量因子，k）：

公式1作為分離度改善的理論基礎(chǔ)。通常，方法開發(fā)過(guò)程中，通過(guò)提高化合物保留 (k)、提高柱效 (N)、以及提升選擇性 (α) 來(lái)達(dá)到分離度的改善。

選擇性因子（α）：

式中 k1 和 k2 分別是第一個(gè)峰和第二個(gè)峰的保留因子。

根據(jù)公式 1 和公式 2，當(dāng)選擇性因子提高 0.1 時(shí)，對(duì)分離度的貢獻(xiàn)是 Rs 大約為原來(lái)的 1.8 倍。因此選擇性的改變對(duì)分離度的改善效果顯著，如圖 1 所示。

與選擇性有關(guān)的因素：

在色譜固定相的選擇和使用中，最常用的鍵合相類型是十八烷基硅烷鍵合硅膠（C18）。不過(guò)，由于固定相物理特性與化學(xué)修飾的差異，使得不同的 C18 選擇性不盡相同。選擇色譜柱時(shí)，如果一種類型的 C18 柱分離度不足，就可以選擇與之選擇性差異較大的 C18 柱來(lái)進(jìn)行優(yōu)化。

以 Agilent InfinityLab Poroshell 系列中的 C18 液相色譜柱為例：

因此，表面化學(xué)結(jié)構(gòu)的差異，三種常用的 Poroshell C18 柱，在選擇性上具有顯著區(qū)別。表 1 列出了以 EC-C18 為基準(zhǔn)，HPH-C18 與 SB-C18 的相似度因子 Fs。當(dāng) Fs 因子大于 3.0 時(shí)，固定相選擇性存在差異。

Poroshell 色譜系列在色譜分析行業(yè)已經(jīng)得到了廣泛的認(rèn)可，安捷倫也一直在拓展 Poroshell 系列色譜柱的產(chǎn)品線。

2020 年 11 月，安捷倫推出了新產(chǎn)品 Poroshell CS-C18 柱，進(jìn)一步拓展了 C18 固定相的類型。該固定相是在 Poroshell 實(shí)心核顆粒的表面多孔層在進(jìn)行高 pH 耐受的雜化處理之后，再進(jìn)行 C18 鍵合、封端和正電荷修飾，其中使用的鍵合相還進(jìn)行了側(cè)立基的保護(hù)。這樣 CS-C18 固定相的表面，不僅具有 C18 提供的疏水作用、而且還具有正電荷的離子作用，選擇性也與其它的 C18 鍵合相有顯著差異。同時(shí)，硅烷鏈側(cè)立基保護(hù)、多孔硅膠表面雜化處理，使得固定相pH耐受范圍得到了拓寬。

在 Poroshell C18 的四種 C18 鍵合相中，涵蓋了 RPLC 模式下的主要作用力，選擇性彼此之間有顯著差異，見圖 2。利用這些固定相的選擇性差異，可以方便地進(jìn)行方法開發(fā)中的色譜柱選擇。

在 pH=10 的體系下，耐堿的 CS-C18 與 HPH-C18 選擇性存在顯著差異。

在酸性體系下，不同 Poroshell C18 柱的保留、分離度有顯著差異。

圖片

在酸性體系下，在堿性藥物阿米替林的雜質(zhì)分析時(shí)，采用 CS-C18 與傳統(tǒng)封端的 C18 柱進(jìn)行比較，CS-C18 柱對(duì)堿性組分具有更好的峰形、載樣量和分離度。

在甲酸體系下，在進(jìn)行液質(zhì)聯(lián)用分析時(shí)，CS-C18 柱提供可更好的靈敏度、響應(yīng)和峰形。