培養(yǎng)基類型

富集培養(yǎng)基和人工培養(yǎng)基是培養(yǎng)基的兩種主要類型。富集培養(yǎng)基通常通過以下兩種方式制備：(1) 通過將土壤或土壤提取物添加到蒸餾水或天然水中，或 (2) 通過將營(yíng)養(yǎng)化學(xué)品添加到天然水（例如海水或湖水）中。人工介質(zhì)僅使用“純”水和“純”化學(xué)品；它不包括添加未定義的土壤或天然湖泊或海水。然而，認(rèn)識(shí)到即使是精心制備的人工培養(yǎng)基中也存在未知的“雜質(zhì)”，這一點(diǎn)非常重要。

富含土壤和水的介質(zhì)適合維持藻類培養(yǎng)。良好的土壤提供無機(jī)和有機(jī)物質(zhì)——藻類生長(zhǎng)良好，并且培養(yǎng)引起的形態(tài)變化是有限的。

通過化學(xué)濃縮海水制備的海洋介質(zhì)很常見。然而，使用湖水或河水進(jìn)行化學(xué)富集的淡水培養(yǎng)并不常見。相反，人工培養(yǎng)基對(duì)于許多淡水藻類的生長(zhǎng)來說很常見并且非常成功，但僅當(dāng)無法使用天然海水基礎(chǔ)進(jìn)行關(guān)鍵研究時(shí)才使用海洋人工培養(yǎng)基。例如，出于研究微量元素的目的，使用精心定義的人造海水介質(zhì)來最小化或排除已知污染物。

類似地，水質(zhì)、玻璃/塑料器皿清潔度等以與化學(xué)質(zhì)量相同的方式影響培養(yǎng)基，即不良或有毒物質(zhì)的存在以及所需物質(zhì)的缺乏會(huì)影響藻類生長(zhǎng)。培養(yǎng)基和培養(yǎng)容器可以通過蒸汽高壓滅菌、巴氏滅菌、過濾或微波進(jìn)行滅菌。

培養(yǎng)容器和材料

用于培養(yǎng)培養(yǎng)物和儲(chǔ)存培養(yǎng)基的所有容器和管道均應(yīng)仔細(xì)選擇，以避免有毒化合物。我們推薦使用硼硅酸鹽玻璃或組織培養(yǎng)級(jí)聚碳酸酯和聚苯乙烯塑料器皿制成的燒瓶和試管。黑色試管螺帽應(yīng)在海水變化時(shí)高壓滅菌幾次，因?yàn)樾缕可w在加熱時(shí)可能會(huì)釋放出有毒的酚類物質(zhì)。

同樣，橡膠塞（或任何其他在加熱時(shí)釋放有氣味的揮發(fā)性化合物的東西）應(yīng)與介質(zhì)分開進(jìn)行高壓滅菌。應(yīng)避免使用帶有銅管的老式高壓滅菌器，因?yàn)檫^量的銅對(duì)藻類有毒。高壓滅菌器蒸汽本身可能被金屬污染，并且培養(yǎng)基可能對(duì)開放海洋物種產(chǎn)生金屬毒性。

新的玻璃器皿應(yīng)在稀 NaOH 中脫脂。玻璃器皿可以定期用稀鹽酸清洗，或者，如果擔(dān)心金屬污染，建議在濃鹽酸中長(zhǎng)時(shí)間浸泡。玻璃器皿不應(yīng)該用鉻酸清洗，因?yàn)殂t對(duì)許多浮游植物有毒。燒瓶可以用用粗棉布、硅膠海綿包裹的棉塞或用燒杯蓋住的塞子蓋住。由箔或塑料燒杯制成的蓋可以防止真菌在潮濕的塞子中生長(zhǎng)。

大多數(shù)科學(xué)家在準(zhǔn)備培養(yǎng)物時(shí)會(huì)豐富天然海水。海水來源可能會(huì)影響成功。一些沿海水域的鹽度降低，某些菌株可能無法忍受。NCMA 使用來自緬因?yàn)车脑妓?，其鹽度約為 32 psu。在水華期間不應(yīng)收集海水，特別是當(dāng)存在有毒生物時(shí)?？梢允褂眠^濾器（例如 0.45 µm 玻璃纖維過濾器）去除天然浮游植物?？梢酝ㄟ^添加來去除溶解的有機(jī)污染物每升加入一到幾克活性炭粉末并充分混合。第二天通過傾析和過濾除去碳。

為了簡(jiǎn)化常規(guī)培養(yǎng)基制備，通常制備工作儲(chǔ)備溶液。添加少量液體儲(chǔ)備溶液比稱量單個(gè)干化學(xué)品更容易、更快捷。最好將原液添加到水中并混合 - 直接混合原液而不用水稀釋可能會(huì)導(dǎo)致不良沉淀。營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化劑要么在滅菌前添加，要么在滅菌后無菌添加。滅菌是通過在 121°C、15 lb/in2 下高壓滅菌 15 分鐘或更長(zhǎng)時(shí)間來完成，具體取決于所涉及的體積。高壓滅菌后應(yīng)盡快冷卻培養(yǎng)基以避免沉淀。二氧化硅可以增強(qiáng)沉淀，因此如果藻類不需要硅，最好將硅酸鹽排除在培養(yǎng)基之外。

營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)可能會(huì)被細(xì)菌或真菌污染。因此，謹(jǐn)慎的做法是首先對(duì)原液進(jìn)行高壓滅菌，然后采用良好的無菌技術(shù)。應(yīng)仔細(xì)密封儲(chǔ)備溶液，因?yàn)檎舭l(fā)會(huì)濃縮營(yíng)養(yǎng)儲(chǔ)備。維生素庫(kù)存可以冷凍很長(zhǎng)時(shí)間而不會(huì)明顯降解。在玻璃容器中高壓滅菌 Na2SiO3 儲(chǔ)備溶液可能會(huì)導(dǎo)致二氧化硅蝕刻或碎片狀沉淀。因此，我們建議在聚四氟乙烯涂層瓶中制備硅酸鹽儲(chǔ)備溶液。

高壓滅菌后，培養(yǎng)基應(yīng)放置約 24 小時(shí)，同時(shí)氣體（尤其是 CO2）擴(kuò)散到液體中。通過快速冷卻可以最大限度地減少沉淀。對(duì)于大多數(shù)海水介質(zhì)來說，最終 pH 值為 7.8-8.2 是理想的。