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解決方案 | 疫苗研發(fā)——病毒顆粒數(shù)檢測(qPCR)自動化體系構(gòu)建方案

來源:??萍瘓F(tuán)股份有限公司   2023年03月22日 13:11  

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隨著基因工程技術(shù)的發(fā)展,病毒載體在目的基因的導(dǎo)入和表達(dá)中得到了廣泛應(yīng)用。由于其效率高、適用細(xì)胞種類多、瞬時表達(dá)等特點,已經(jīng)廣泛應(yīng)用于疫苗研發(fā)領(lǐng)域,對病毒顆粒數(shù)進(jìn)行實時的檢測是工藝中的關(guān)鍵環(huán)節(jié),病毒的定量檢測對于疫苗的指導(dǎo)研發(fā)和質(zhì)量控制具有重要意義。

目前進(jìn)行病毒定量的方法主要是實時熒光定量PCR方法(Real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction , RT-qPCR),通過熒光定量的方法對模版拷貝數(shù)進(jìn)行定量, 每個模板的Ct值與該模板起始拷貝數(shù)的對數(shù)存在線性關(guān)系,利用已知起始拷貝數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)品可作出標(biāo)準(zhǔn)曲線,最后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析,從而反映完整病毒顆粒數(shù)。

實時熒光定量PCR法目前已經(jīng)發(fā)展成為病毒定量檢測使用廣泛的技術(shù)之一,具有特異性好、靈敏度高、污染小等優(yōu)勢。但實時熒光定量PCR法前期體系構(gòu)建樣品制備繁瑣且不穩(wěn)定,極占實驗員時間和精力的同時也影響定量結(jié)果。

睿科Vitae 100 全自動化PCR體系構(gòu)建系統(tǒng)能夠?qū)崿F(xiàn)體系構(gòu)建流程自動化,移液準(zhǔn)確且穩(wěn)定,實驗結(jié)果滿足需求,解放雙手的同時保證了樣品檢測結(jié)果的可靠性。




整體實驗流程

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病毒顆粒數(shù)檢測(qPCR)整體實驗流程






應(yīng)用場景




睿科生化為某疫苗公司腺病毒顆粒數(shù)檢測提供自動化體系構(gòu)建方案,具體方案如下:










實驗流程






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疫苗公司腺病毒顆粒數(shù)檢測自動化體系構(gòu)建流程




實驗結(jié)果




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標(biāo)準(zhǔn)曲線圖





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樣品擴(kuò)增圖


標(biāo)準(zhǔn)曲線圖,根據(jù)主要Slope數(shù)值判斷曲線的點稀釋是否準(zhǔn)確,結(jié)果顯示,與客戶手動操作的slope值(Slope=-3.376)一致,R2=0.999代表曲線偏離,標(biāo)準(zhǔn)曲線配置符合要求。


樣品擴(kuò)增圖,底部ROX所在區(qū)域越集中,即體系分裝越準(zhǔn)確。結(jié)果顯示,體系構(gòu)建分裝準(zhǔn)確,符合要求。






產(chǎn)品優(yōu)勢






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Vitae 100全自動PCR體系構(gòu)建系統(tǒng)


1、機(jī)械臂定位準(zhǔn)確到0.05mm,移液精確度CV≤2%,數(shù)據(jù)穩(wěn)定可靠;

2、儀器能有效解決疫苗研發(fā)過程中,樣品檢測和產(chǎn)品放行人工操作不穩(wěn)定的困境;

3、加樣過程自動化,體系構(gòu)建全程用時25min,節(jié)省時間和人力;

4、配備紫外消毒燈和HEPA過濾裝置,保證操作安全性。






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