用于ELISA實驗的樣本有多種類型，包括血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清、尿液以及組織勻漿等。不同樣本類型的預(yù)處理方法存在差異。合適的樣本預(yù)處理，是確保ELISA實驗準(zhǔn)確性的di一步。這里，我們將介紹幾種不同樣本類型的處理方法：

常規(guī)樣本處理方式 

01血清

血清是ELISA實驗常用的樣本，其預(yù)處理也十分簡單。

①   使用無熱原、無內(nèi)毒素的試管或離心管采集血液樣本，將試管或離心管在室溫下放置1小時或2-8℃過夜，分離出血清；

②   2-8℃條件下，以1000×g離心20分鐘，小心收集上層血清。

02血漿

①   使用含抗凝劑的采血管或離心管采集血液樣本，采集后30分鐘內(nèi)，2-8℃條件下，以1000×g離心15分鐘，小心收集上層血漿；

②   常見的抗凝劑包括：EDTA鈉鹽，肝素鈉，枸櫞酸鈉等。

03細(xì)胞培養(yǎng)上清

將細(xì)胞培養(yǎng)上清液吸入離心管中，在2-8℃條件下，以1000×g離心20分鐘，除去細(xì)胞碎片和雜質(zhì)，收集上清液。

04細(xì)胞裂解液

①吸出培養(yǎng)板中的培養(yǎng)基，用胰蛋白酶消化細(xì)胞，再加入適量的培養(yǎng)基，將培養(yǎng)板上的細(xì)胞沖洗干凈（懸浮細(xì)胞可以省略該步驟）；

②將細(xì)胞懸浮液收集到離心管中，在2-8℃條件下，以1000×g離心5分鐘，再吸去培養(yǎng)基，用預(yù)冷PBS洗滌細(xì)胞3次；

③加入適量的預(yù)冷PBS（建議在使用前立即加入蛋白酶抑制劑），重懸細(xì)胞。添加比例：約1×10⁶個細(xì)胞加入150-250μL PBS重懸細(xì)胞；

④使樣本在-20℃或-80℃條件和室溫條件下反復(fù)凍融，重復(fù)凍融過程數(shù)次，直至細(xì)胞*裂解。也可使用超聲波細(xì)胞破碎器，超聲處理懸浮液來裂解細(xì)胞；

⑤2-8℃條件下，以1500×g離心10分鐘，去除細(xì)胞碎片，收集上清液。

05組織勻漿

①用預(yù)冷的PBS（0.01M，PH7.4）沖洗組織，除去表面殘留的血液或雜質(zhì)；

②將組織塊稱重，再切成盡可能小的碎塊，以便充分勻漿；

③加入適量的預(yù)冷PBS（一般按1:9的重量體積比，比如1g組織樣品對應(yīng)9mL PBS，具體體積可根據(jù)實驗需要適當(dāng)調(diào)整，并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑），用玻璃勻漿器在冰上或冰浴中充分勻漿。為了進(jìn)一步裂解組織細(xì)胞，可以對勻漿液進(jìn)行超聲破碎，或反復(fù)凍融；

④將勻漿液吸入離心管中，2-8℃條件下，以5000×g離心5分鐘，收集上清液。

特殊樣本處理方式

01唾液

在2-8℃條件下，4000×g離心10分鐘，以去除雜質(zhì)。取上清，即可檢測。建議使用新鮮的唾液樣本。

02尿液

使用無菌容器收集尿液樣本。在2-8℃條件下，1000×g離心15分鐘，以去除雜質(zhì)。取上清，即可檢測。

03糞便

以9mL/g的比例，向糞便中添加PBS緩沖液（0.01M，pH=7.4；可選擇性添加0.05M EDTA），置于冰上振蕩15分鐘。在2-8℃條件下，5000×g離心5-10分鐘，取上清，即可檢測。

 樣本注意事項

01樣本收集

1. 血液樣本采集時，應(yīng)盡可能避免溶血現(xiàn)象，同時也應(yīng)避免細(xì)菌污染，以免造成假陽性結(jié)果。

2. 避免使用高血脂樣本。脂質(zhì)會影響抗原抗體的結(jié)合，從而影響測值的準(zhǔn)確性。

02樣本保存

樣品收集后，若在1周內(nèi)進(jìn)行檢測，可保存于2-8℃的環(huán)境中；若不能及時檢測，請按一次使用量分裝，凍存于-20℃（1個月內(nèi)檢測）或-80℃（3個月內(nèi)檢測）的環(huán)境中，避免反復(fù)凍融。實驗前，建議再次離心，去除沉淀物。

03樣本稀釋

試劑盒的檢測范圍不等同于樣本的濃度范圍。如果樣品中檢測物濃度高于標(biāo)準(zhǔn)品的zui高值，請根據(jù)實際情況，做適當(dāng)倍數(shù)稀釋（建議查閱文獻(xiàn)，并做預(yù)實驗）。

04樣本成分

收集組織與細(xì)胞提取液樣本時，不建議使用商品化的裂解試劑。裂解試劑中的成分，可能會影響抗原抗體結(jié)合，或造成基質(zhì)干擾，影響實驗結(jié)果。