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模型動(dòng)物小課堂：常用的動(dòng)物模型SOP（二）
7.大腦中動(dòng)脈栓塞和缺血再灌注（線栓法）
大鼠大腦中動(dòng)脈栓塞和缺血再灌注[19]（供參考）
SD大鼠，雄性，250g-300g，暴露左頸總動(dòng)脈（CCA）、頸外動(dòng)脈（ECA）和頸內(nèi)動(dòng)脈（ICA），從ECA插入3-0尼龍單絲縫線由ICA直至大腦中動(dòng)脈 （MCA）。 MCA 閉塞 1.5 小時(shí)后，通過去除細(xì)絲來模擬再灌注。 在手術(shù)過程中，所有大鼠的體溫均保持在37.0°C。
模型鑒定
Longa五分法對(duì)鼠神經(jīng)功能進(jìn)行評(píng)分
小鼠大腦中動(dòng)脈栓塞和缺血再灌注[20]（供參考）
C57BL/6，8周，用1.5%異氟烷麻醉小鼠。在顯微鏡下，通過中線頸部切口暴露左側(cè)頸總動(dòng)脈和頸外動(dòng)脈。將涂有硅橡膠(Doccol)的6–0尼龍單絲通過頸外動(dòng)脈殘端引入左側(cè)頸內(nèi)動(dòng)脈，以閉塞大腦中動(dòng)脈的起點(diǎn)并阻斷流向紋狀體和皮層的血流。閉塞60分鐘后，通過抽絲引入再灌注，并縫合切口。在整個(gè)過程中，體溫保持在37±0.5℃。
8.膠原誘導(dǎo)風(fēng)濕類關(guān)節(jié)炎模型
大鼠膠原誘導(dǎo)風(fēng)濕類關(guān)節(jié)炎模型[21]（供參考）
SD大鼠，200g-250g，用等體積的不*弗氏佐劑IFA乳化牛ⅱ型膠原(CII)。然后將含CII的乳劑(0.2毫升)皮內(nèi)注射入大鼠的尾根以誘導(dǎo)炎癥(初次免疫)。在初次免疫后的第7天，將相同體積的該乳劑皮內(nèi)注射到大鼠的左后肢中，以增強(qiáng)初次免疫(第二次免疫)。
模型鑒定
沒有關(guān)節(jié)腫脹跡象的動(dòng)物被移除。后肢關(guān)節(jié)腫脹度評(píng)分如下:0，無紅腫；1、輕度紅腫；2、中度紅腫并伴有關(guān)節(jié)活動(dòng)度的微小變化；3、嚴(yán)重紅腫，伴有關(guān)節(jié)僵硬和活動(dòng)明顯受限。
小鼠膠原誘導(dǎo)風(fēng)濕類關(guān)節(jié)炎模型[22]（供參考）
昆明小鼠，22-26g，用等體積的*或不*弗氏佐劑乳化 0.01 M 乙酸中的豬 II 型膠原溶液（2 mg/ml）。 第0天，昆明小鼠在尾根部皮下注射100μl*弗氏佐劑中的II型膠原蛋白。第一次免疫后第21天，小鼠腹腔注射100μlII型膠原蛋白 不*弗氏佐劑。之后再過7天成模。
9.妊娠糖尿病
大鼠妊娠糖尿病[23]（供參考）
Wistar 大鼠，體重為 180-220 克（12 周齡），在適應(yīng)飲食和環(huán)境 2 周后，將雌性 Wistar 大鼠與經(jīng)過驗(yàn)證的繁殖雄性放置過夜進(jìn)行繁殖。 第二天早上進(jìn)行陰道涂片檢查是否存在jing子。 一旦觀察到j(luò)ing子，那一天被定為妊娠第 0 天 (GD0)。 在妊娠第 1 天，孕婦隨機(jī)分為對(duì)照組和糖尿病組。 糖尿病組 6 只雌性大鼠接受 40 毫克/千克/體重的鏈脲佐菌素（STZ）（Sigma，St Louis，MO，USA）溶解在無菌鹽水溶液（0.85%）中，對(duì)照組（6 只大鼠）接受等量的 體積生理鹽水腹腔注射 (IP)。
模型鑒定
注射72小時(shí)后，血糖水平為 120-250 mg/dl 的母鼠被認(rèn)為是妊娠糖尿病 (GDM)。
10.哮喘模型
大鼠哮喘模型[24]（供參考）
SD大鼠，6周左右，180g-200g，實(shí)驗(yàn)第一天，每只大鼠腹腔注射1 mL 10% OVA溶液，含100 mg氫氧化鋁干粉。致敏兩周后，這些大鼠通過霧化給藥1％OVA溶液（溶解在生理鹽水中）誘發(fā)哮喘，連續(xù)三天開始，然后隔天刺激一次，持續(xù)20分鐘。
模型鑒定
如果大鼠出現(xiàn)呼吸加速、打噴嚏、口周發(fā)紺、腹部痙攣和點(diǎn)頭式呼吸，則表明成功刺激了大鼠的哮喘。
小鼠哮喘模型[25]（供參考）
BALB/c小鼠，在第 1 天和第 8 天，通過腹膜內(nèi)注射 500 μL 鹽水中的 20 μg OVA（Sigma Chemical Co.）和 1 mg 氫氧化鋁（Sigma Chemical Co.）使小鼠致敏。在第 21 天，使用霧化器（3 mL/min，NE-U17，OMRON Co. Ltd.，Kyoto，Japan）用 5% OVA 每天對(duì)小鼠進(jìn)行一次攻擊，持續(xù) 5 天，持續(xù) 30 分鐘。
參考文獻(xiàn)
[19]Lixisenatide Reduced Damage in Hippocampus CA1 Neurons in a Rat Model of Cerebral Ischemia-Reperfusion Possibly Via the ERK/P38 Signaling Pathway
[20]Neuroprotective effect of p-coumaric acid in mice with cerebral ischemia reperfusion injuries
[21]urcumin attenuates collagen-induced rat arthritis via anti-inflammatory and apoptotic effects
[22] Flaccidoside II ameliorates collagen-induced arthritis in mice
[23]Gestational diabetes influences retinal Muller cells in rat’s offspring
[24]Soufeng Yuchuan decoction mitigates the ovalbumin-induced lung damage in a rat model of asthma
[25]1-Acetoxychavicol Acetate Isolated from Alpinia galanga Ameliorates Ovalbumin-Induced Asthma in Mice
[26]鄺滿元, 劉映霞, 李映菊. 肝纖維化動(dòng)物模型造模方法的研究進(jìn)展[J]. 現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展, 2008, 08(009):1768-1770.
[27] Liu Y , Gu X . Establishment and evaluation of cholestatic liver fibrosis model induced by bile duct ligation in SD rat[J]. Chongqing Medicine, 2012.
[28]Xiao Y Y . Establishment and evaluation of liver fibrosis model induced by bile duct ligation in mouse[J]. Journal of Chongqing Medical University, 2008.
[29] KALU DN .The ovariectomized rat model of postmenopausal bone loss [ J ] .Bone and Mineral, 1991, 15 :175 -192 .
大鼠大腦中動(dòng)脈栓塞和缺血再灌注[19]（供參考）
SD大鼠，雄性，250g-300g，暴露左頸總動(dòng)脈（CCA）、頸外動(dòng)脈（ECA）和頸內(nèi)動(dòng)脈（ICA），從ECA插入3-0尼龍單絲縫線由ICA直至大腦中動(dòng)脈 （MCA）。 MCA 閉塞 1.5 小時(shí)后，通過去除細(xì)絲來模擬再灌注。 在手術(shù)過程中，所有大鼠的體溫均保持在37.0°C。
模型鑒定
Longa五分法對(duì)鼠神經(jīng)功能進(jìn)行評(píng)分
小鼠大腦中動(dòng)脈栓塞和缺血再灌注[20]（供參考）
C57BL/6，8周，用1.5%異氟烷麻醉小鼠。在顯微鏡下，通過中線頸部切口暴露左側(cè)頸總動(dòng)脈和頸外動(dòng)脈。將涂有硅橡膠(Doccol)的6–0尼龍單絲通過頸外動(dòng)脈殘端引入左側(cè)頸內(nèi)動(dòng)脈，以閉塞大腦中動(dòng)脈的起點(diǎn)并阻斷流向紋狀體和皮層的血流。閉塞60分鐘后，通過抽絲引入再灌注，并縫合切口。在整個(gè)過程中，體溫保持在37±0.5℃。
8.膠原誘導(dǎo)風(fēng)濕類關(guān)節(jié)炎模型
大鼠膠原誘導(dǎo)風(fēng)濕類關(guān)節(jié)炎模型[21]（供參考）
SD大鼠，200g-250g，用等體積的不*弗氏佐劑IFA乳化牛ⅱ型膠原(CII)。然后將含CII的乳劑(0.2毫升)皮內(nèi)注射入大鼠的尾根以誘導(dǎo)炎癥(初次免疫)。在初次免疫后的第7天，將相同體積的該乳劑皮內(nèi)注射到大鼠的左后肢中，以增強(qiáng)初次免疫(第二次免疫)。
模型鑒定
沒有關(guān)節(jié)腫脹跡象的動(dòng)物被移除。后肢關(guān)節(jié)腫脹度評(píng)分如下:0，無紅腫；1、輕度紅腫；2、中度紅腫并伴有關(guān)節(jié)活動(dòng)度的微小變化；3、嚴(yán)重紅腫，伴有關(guān)節(jié)僵硬和活動(dòng)明顯受限。
小鼠膠原誘導(dǎo)風(fēng)濕類關(guān)節(jié)炎模型[22]（供參考）
昆明小鼠，22-26g，用等體積的*或不*弗氏佐劑乳化 0.01 M 乙酸中的豬 II 型膠原溶液（2 mg/ml）。 第0天，昆明小鼠在尾根部皮下注射100μl*弗氏佐劑中的II型膠原蛋白。第一次免疫后第21天，小鼠腹腔注射100μlII型膠原蛋白 不*弗氏佐劑。之后再過7天成模。
9.妊娠糖尿病
大鼠妊娠糖尿病[23]（供參考）
Wistar 大鼠，體重為 180-220 克（12 周齡），在適應(yīng)飲食和環(huán)境 2 周后，將雌性 Wistar 大鼠與經(jīng)過驗(yàn)證的繁殖雄性放置過夜進(jìn)行繁殖。 第二天早上進(jìn)行陰道涂片檢查是否存在jing子。 一旦觀察到j(luò)ing子，那一天被定為妊娠第 0 天 (GD0)。 在妊娠第 1 天，孕婦隨機(jī)分為對(duì)照組和糖尿病組。 糖尿病組 6 只雌性大鼠接受 40 毫克/千克/體重的鏈脲佐菌素（STZ）（Sigma，St Louis，MO，USA）溶解在無菌鹽水溶液（0.85%）中，對(duì)照組（6 只大鼠）接受等量的 體積生理鹽水腹腔注射 (IP)。
模型鑒定
注射72小時(shí)后，血糖水平為 120-250 mg/dl 的母鼠被認(rèn)為是妊娠糖尿病 (GDM)。
10.哮喘模型
大鼠哮喘模型[24]（供參考）
SD大鼠，6周左右，180g-200g，實(shí)驗(yàn)第一天，每只大鼠腹腔注射1 mL 10% OVA溶液，含100 mg氫氧化鋁干粉。致敏兩周后，這些大鼠通過霧化給藥1％OVA溶液（溶解在生理鹽水中）誘發(fā)哮喘，連續(xù)三天開始，然后隔天刺激一次，持續(xù)20分鐘。
模型鑒定
如果大鼠出現(xiàn)呼吸加速、打噴嚏、口周發(fā)紺、腹部痙攣和點(diǎn)頭式呼吸，則表明成功刺激了大鼠的哮喘。
小鼠哮喘模型[25]（供參考）
BALB/c小鼠，在第 1 天和第 8 天，通過腹膜內(nèi)注射 500 μL 鹽水中的 20 μg OVA（Sigma Chemical Co.）和 1 mg 氫氧化鋁（Sigma Chemical Co.）使小鼠致敏。在第 21 天，使用霧化器（3 mL/min，NE-U17，OMRON Co. Ltd.，Kyoto，Japan）用 5% OVA 每天對(duì)小鼠進(jìn)行一次攻擊，持續(xù) 5 天，持續(xù) 30 分鐘。
參考文獻(xiàn)
[19]Lixisenatide Reduced Damage in Hippocampus CA1 Neurons in a Rat Model of Cerebral Ischemia-Reperfusion Possibly Via the ERK/P38 Signaling Pathway
[20]Neuroprotective effect of p-coumaric acid in mice with cerebral ischemia reperfusion injuries
[21]urcumin attenuates collagen-induced rat arthritis via anti-inflammatory and apoptotic effects
[22] Flaccidoside II ameliorates collagen-induced arthritis in mice
[23]Gestational diabetes influences retinal Muller cells in rat’s offspring
[24]Soufeng Yuchuan decoction mitigates the ovalbumin-induced lung damage in a rat model of asthma
[25]1-Acetoxychavicol Acetate Isolated from Alpinia galanga Ameliorates Ovalbumin-Induced Asthma in Mice
[26]鄺滿元, 劉映霞, 李映菊. 肝纖維化動(dòng)物模型造模方法的研究進(jìn)展[J]. 現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展, 2008, 08(009):1768-1770.
[27] Liu Y , Gu X . Establishment and evaluation of cholestatic liver fibrosis model induced by bile duct ligation in SD rat[J]. Chongqing Medicine, 2012.
[28]Xiao Y Y . Establishment and evaluation of liver fibrosis model induced by bile duct ligation in mouse[J]. Journal of Chongqing Medical University, 2008.
[29] KALU DN .The ovariectomized rat model of postmenopausal bone loss [ J ] .Bone and Mineral, 1991, 15 :175 -192 .
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